[发明专利]一种适于固体发酵生产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌诱变菌株及其培养方法

权利要求书

1.一种适于固体发酵生产γ-聚谷氨酸的枯草芽孢杆菌诱变菌株DG02，其分类命名为Bacillus subtilis，其特征在于，该菌株已于2019年4月9日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCC No.60626。

2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)诱变菌株在固体发酵生产γ-聚谷氨酸中的应用。

3.一种应用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)诱变菌株通过固体发酵生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，采用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌诱变菌株作为生产γ-聚谷氨酸的菌种，将该枯草芽孢杆菌诱变菌株依次接种于斜面培养基、种子液培养基和固体发酵培养基中进行好氧培养，发酵得到γ-聚谷氨酸。

4.根据权利要求3所述的应用枯草芽孢杆菌诱变菌株通过固体发酵生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，

所述的斜面培养基组成为：豆芽汁1000 mL，蔗糖10~60 g，琼脂20 g， pH6.0~8.0；或者设置所述的斜面培养基组成为：豆芽汁1000 mL，葡萄糖10~60 g，琼脂20 g， pH6.0~8.0；

所述种子液培养基的组成如下：豆芽汁1000 mL，蔗糖10~60 g， pH6.0~8.0，115℃灭菌20 min，或者设置所述种子液培养基的组成如下：豆芽汁1000 mL，葡萄糖10~60 g， pH6.0~8.0，115℃灭菌 20 min；

豆芽汁的制备方法为：大豆芽0.5 kg，加水2.5 kg，煮沸，浓缩至1000 mL，过滤取汁。

5.根据权利要求3所述的应用枯草芽孢杆菌诱变菌株通过固体发酵生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，

所述的固体发酵培养基的配方包含固体基质和营养液两部分，

所述固体基质的组成为：脱脂黄豆饼粉与麸皮按质量比为1：1~1.5混合；

所述营养液成分为：葡萄糖10~60 g/L、酵母膏5~20 g/L、谷氨酸钠10~50g/L、柠檬酸钠5~30g/L、K₂HPO₄ 0.5~2.0g/L、FeCl₃•6H₂O 0.04g/L、MnSO₄•H₂O 0.1g/L、MgSO₄•7H₂O 0.5g/L、CaCl₂•2H₂O 0.2g/L，初始pH6.0~8.0，溶剂为水；

或者设置所述营养液成分为：蔗糖10~60 g/L、酵母膏5~20 g/L、谷氨酸钠10~50g/L、柠檬酸钠5~30g/L、K₂HPO₄ 0.5~2.0g/L、FeCl₃•6H₂O 0.04g/L、MnSO₄•H₂O 0.1g/L、MgSO₄•7H₂O0.5g/L、CaCl₂•2H₂O 0.2g/L，初始pH6.0~8.0，溶剂为水；

所述固体基质与所述营养液混合比例为质量比1:1~1.5，搅拌均匀后于115℃灭菌20min。

6.根据权利要求3或4所述的应用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)诱变菌株通过固体发酵生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，将所述诱变菌株于斜面培养基中，在30~37℃活化培养12~36 h；将活化的斜面菌种接种于种子液培养基，250mL锥形瓶中种子液装液量为40~100 mL，30~40 ℃、150 r/min摇床上恒温培养15~28 h即为种子液。

7.根据权利要求3或5所述的应用枯草芽孢杆菌诱变菌株通过固体发酵生产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，以2~10%的接种量将种子液接入固体发酵培养基，搅拌均匀后于30~40℃静置培养24~72 h，空气相对湿度80~95 %。