[发明专利]一种参与聚合延伸的寡核苷酸链探针及其核酸扩增试剂盒在审
| 申请号： | 201910302822.8 | 申请日： | 2019-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN109988758A | 公开（公告）日： | 2019-07-09 |
| 发明（设计）人： | 周中人;许向华;张磊;张桂平 | 申请（专利权）人： | 上海快灵生物科技有限公司;上海快灵生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 上海华工专利事务所(普通合伙) 31104 | 代理人： | 赵孟琴;缪利明 |
| 地址： | 201314 上海市浦东新*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 寡核苷酸链 探针 聚合 延伸 核酸扩增试剂盒 茎环结构 靶序列 荧光淬灭基团 最小自由能 互补序列 结构序列 连接位置 荧光基团 环序列 尾序列 单链 碱基 引物 | ||
1.一种参与聚合延伸的寡核苷酸链探针，其特征在于，寡核苷酸链探针的最小自由能结构是茎环结构，其序列自5’端至3’端依次为如下四区段：茎结构序列MB-J、环序列MB-H、茎结构互补序列MB-Jc、单链尾序列MB-P；一组荧光淬灭基团和荧光基团分别连接在MB-J的5’端和MB-Jc链中间碱基，两连接位置在茎环结构中相邻近；MB-H和MB-P与靶序列全部或部分互补，且MB-P的3’端与靶序列互补并能延伸聚合。
2.如权利要求1所述的参与聚合延伸的寡核苷酸链探针，其特征在于，MB-Jc的序列全部或部分与靶序列互补。
3.如权利要求1所述的参与聚合延伸的寡核苷酸链探针，其特征在于，参与聚合延伸的寡核苷酸链探针为RNA或DNA。
4.一种核酸扩增试剂盒，包括根据靶序列设计的引物，其特征在于，还包括至少一种链置换DNA聚合酶以及如权利要求1或2所述的参与聚合延伸的寡核苷酸链探针。
5.如权利要求4所述的核酸扩增试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括至少一种链置换DNA聚合酶及与靶序列互补的四条按环介导等温扩增方法设计的引物；这四条引物分别为F3、FIP、BIP、B3，靶序列上存在与FIP、BIP相关的F1c/B1序列，其中寡核苷酸链探针的序列全部或部分与靶序列上F1c的3’端上游序列相同或与靶序列上B1的5’端下游的序列互补，或寡核苷酸链探针的序列来自靶序列以外来源。
6.如权利要求4所述的核酸扩增试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括至少一种链置换DNA聚合酶及与靶序列互补的至少一条按滚环扩增方法设计的引物，寡核苷酸链探针的序列全部或部分与靶序列上互补或相同。
7.如权利要求4所述的核酸扩增试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括至少一种链置换DNA聚合酶及与靶序列互补的至少两条引物分别为F/R，寡核苷酸链探针的序列全部或部分与靶序列上除F/R以外的其他序列互补或相同。
8.如权利要求7所述的核酸扩增试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括至少一种链置换DNA聚合酶及与靶序列互补的至少两条按重组酶聚合酶扩增方法设计的引物分别为F/R，寡核苷酸链探针的序列全部或部分与靶序列上除F/R以外的其他序列互补或相同。
9.如权利要求7所述的核酸扩增试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括至少一种链置换DNA聚合酶及与靶序列互补的至少两条按解链酶依赖扩增方法设计的引物分别为F/R，寡核苷酸链探针的序列全部或部分与靶序列上除F/R以外的其他序列互补或相同。
10.如权利要求4所述的核酸扩增试剂盒，其特征在于，还包括一种用于检测核酸含量的荧光染料，该荧光染料的探测波长与寡核苷酸链探针的荧光探测波长设置在不同通道。
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