[发明专利]一种基于固相凝集技术的汇检式红细胞血型不规则抗体检测试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种基于固相凝集技术的汇检式红细胞血型不规则抗体检测试剂盒，其特征在于：该汇检式红细胞血型不规则抗体检测试剂盒，包括：

(1)汇检式固相凝集反应微板，所述的汇检式固相凝集反应微板由96孔U型底可拆卸式微板条组成，微板条的U型孔底内表面包被有高特异性的抗红细胞单克隆抗体，已筛选合格的Ⅰc、Ⅱc、Ⅲc号抗筛红细胞用生理盐水洗涤3次后等体积汇集制备成0.1％的抗筛红细胞悬液，每个微孔中加入100uL，通过抗红细胞单克隆抗体对红细胞的高特异性免疫反应，将红细胞均匀地包被在孔底内表面，经裂解后形成固定于U型孔底内表面的汇检式抗筛红细胞膜，在此基础上加入细胞膜冷冻保护液，经过冷冻干燥后制备的微板；

(2)低离子强度溶液，所述的低离子强度溶液包含甘氨酸和0.1％叠氮化钠；

(3)指示系统，所述的指示系统包括指示红细胞和抗人球蛋白试剂；

其中，指示红细胞是指IgG抗-D致敏的O型RhD(+)红细胞悬液，浓度为0.2～0.6％；抗人球蛋白试剂是指1:1～1:128倍稀释的羊抗人或者兔抗人IgG抗体；

(4)阴性对照血清，是未含有不规则抗体且加入0.10％叠氮化钠的健康人血清；

(5)阳性对照血清，是包含有IgG抗-D且加入0.10％叠氮化钠的健康人血清；

所述的汇检式抗筛红细胞膜是指3个单人份O型红细胞等量汇集后包被于U型板单个孔底内表面，互补抗原谱至少包括：D，C，E，c，e，JKa，JKb，Lub，k，M，N，S，s，Fya，P1，Mur，Dia抗原,单孔内汇集的细胞经裂解后形成的细胞膜即为汇检式抗筛细胞膜单层,可用于检测上述抗原对应的不规则抗体；3个单人份红细胞的Rh抗原表型应分别为：CCDee，ccDEE，CcDEe；

所述的细胞膜冷冻保护液为蔗糖溶液。

2.根据权利要求1所述的一种基于固相凝集技术的汇检式红细胞血型不规则抗体检测试剂盒，其特征在于：所述的微板条U型孔底内表面已经包被抗红细胞单克隆抗体，对汇集的Ⅰc、Ⅱc、Ⅲc号抗筛红细胞的吸附作用具有高度特异性。

3.一种基于固相凝集技术的汇检式红细胞血型不规则抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

(1)汇检式固相凝集反应微板的制备；

(2)低离子强度溶液的制备；

(3)指示系统的制备；

(4)阴性对照血清的制备；

(5)阳性对照血清的制备；

具体步骤如下：

(1)组建不规则抗体筛选谱细胞系采用单克隆抗体对O型红细胞进行筛选，根据抗原互补原则，组建由3个O型红细胞组成的抗体筛选细胞系，具体的抗原分型谱如下：

(2)汇检式固相凝集反应微板的制备空白微板材质为聚苯乙烯，作用是包被抗红细胞单克隆抗体、固定抗筛红细胞膜、容纳受检血浆、低离子液和指示系统，本身不参与化学反应，微板的条与条可拆卸；抗红细胞单克隆抗体用碳酸盐缓冲液稀释后，每孔中加入100μL，室温包被16小时，在此基础上，将所述抗筛红细胞等量汇集后制备为0.1％浓度的悬液，每个微孔中加入100μL，离心5分钟后，洗涤5次，加入红细胞裂解液进行裂解；洗涤板条后，加入含8％蔗糖的冷冻保护液，50μL/孔，然后去掉孔中液体，并用吸水纸吸干残液，放入冷冻干燥机中冻干2小时，取出后装入铝箔袋中，加热密封即可；

(3)低离子强度溶液的制备：

称取18克甘氨酸和1克叠氮钠用纯化水溶解后，定容至1L，再加入适量的溴甲酚紫溶液，直至溶液颜色由透明无色变为深紫色，调节溶液pH至6.8；

(4)指示系统的制备：指示系统包括指示红细胞和兔或羊抗人球蛋白试剂，指示红细胞的制备过程如下：洗涤后制成压积的O型红细胞，加入等体积的IgG抗-D，37℃孵育50分钟，制得IgG抗-D致敏的红细胞，生理盐水洗涤5次后，用红细胞保存液保存，抗人球蛋白试剂的制备过程如下：将兔或羊抗人球蛋白试剂用抗体稀释液进行稀释，与致敏红细胞反应，以离心后显微镜下观察至不凝集管作为抗人球蛋白试剂的稀释倍数，该稀释倍数的抗人球试剂与已致敏的O型红细胞悬液构成指示系统；

(5)阴性对照血清的制备：筛选出与所述的抗筛红细胞均无凝集反应的人血清，加入叠氮化钠，终浓度为0.10％；

(6)阳性对照血清制备：是指包含有IgG抗-D且加入0.10％叠氮化钠的人血清。