[发明专利]一种基于核酸适配体荧光传感器用于多目标物检测的方法

权利要求书

1.一种基于核酸适配体荧光传感器用于多目标物检测的方法，其特征在于检测方法包括如下步骤：

a)将DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒在缓冲液1中混合并孵育；

b)将多个不同浓度的目标物分子干扰素-γ、腺苷和凝血酶分别加入步骤a)得到的混合体系进行反应并孵育；

c)分别将步骤b)所得混合物测其在535nm激发波长下，625nm处的荧光值，利用测得的I₆₂₅处荧光读数与未加入目标物分子时I₆₂₅荧光读数差值比例F_r，获得干扰素-γ、腺苷或凝血酶浓度与F_r的线性关系；

d)将待测样品与步骤a)所得混合体系混合，然后测其I₆₂₅处荧光读数，根据步骤c)所得到的线性关系与待测样品获得的荧光强度，继而得到待测样品中干扰素-γ、腺苷和凝血酶的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种基于核酸适配体荧光传感器用于多目标物检测的方法，其特征在于步骤a)中所述的缓冲液1具体配方是10mM Na₂HPO₄/NaH₂PO₄、100mM CH₃COONa和10mM Mg(CH₃COOH)₂,pH＝7.4。

3.根据权利要求1所述的基于核酸适配体荧光传感器用于多目标物检测的方法，其特征在于是用以下DNA序列制备AgP1(干扰素-γ)、AgP2(腺苷)和AgP3(凝血酶)三种DNA-银纳米簇：

AgP1模板：ACCCGAACCTGGGCTACCACCCTTAATCCCCACCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGT。

AgP2模板：ACCCGAACCTGGGCTACCACCCTTAATCCCCGGTTGGTGTGGTTGG。

AgP3模板；ACCCGAACCTGGGCTACCACCCTTAATCCCCGGGGTTGGTTGTGTTGGGTGTTGTGT。

4.根据权利要求3所述的基于核酸适配体荧光传感器用于多目标物检测的方法，其特征在于，步骤a)中DNA-银纳米簇与聚吡咯纳米粒在缓冲液1中混合步骤为：用缓冲液1将聚吡咯纳米粒稀释至0.12mg/mL，随后，将5μL,15μM的AgP1，5μL,15μM的AgP2和5μL,15μM的AgP3与40μL,0.12mg/mL的聚吡咯纳米粒混合。

5.根据权利要求1所述的基于核酸适配体荧光传感器用于多目标物检测的方法，其特征在于步骤a)所述的孵育为在36-38℃下孵育10-15min，优选孵育为在37℃下孵育15min。

6.根据权利要求1所述的基于核酸适配体荧光传感器用于多目标物检测的方法，其特征在于步骤b)所述的干扰素-γ的浓度范围是2nM-25nM，腺苷的浓度范围是0nM-12.5nM，凝血酶的浓度范围是2nM-25nM。

7.根据权利要求6所述的基于核酸适配体荧光传感器用于多目标物检测的方法，其特征在于，步骤b)具体为：每45μL步骤a)制备的混合体系与体积为20μL浓度为2nM-25nM的干扰素-γ溶液或体积为20μL浓度为0nM-12.5nM的腺苷或体积为20μL浓度为2nM-25nM的凝血酶溶液混合，再加入35μL缓冲液3，在37℃下反应1h；其中，缓冲液3为10mMTris-HCl缓冲液,pH8，10mM氯化钾，15mM氯化镁。

8.根据权利要求1所述的基于核酸适配体荧光传感器用于多目标物检测的方法，其特征在于，步骤c)具体为：将步骤b)所得混合物分别在激发波长为535nm，测定625nm处的荧光值；扫描速度为1200nm/min，光电倍增管电压为900V，激发狭缝和发射狭缝宽度为5nm，利用测得的I₆₂₅荧光读数差值比例F_r，获得目标物浓度与F_r的线性关系。