[发明专利]一种直接揭示基因功能的蛋白互作载体及其制备、应用方法在审
| 申请号： | 201910305758.9 | 申请日： | 2019-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN110195076A | 公开（公告）日： | 2019-09-03 |
| 发明（设计）人： | 王长春;刘敏;韩佳峰;钟延辉;郑瑶瑶;金一禾;蒋泽炜;陈丽双 | 申请（专利权）人： | 浙江师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00;G01N33/68 |
| 代理公司： | 济南誉琨知识产权代理事务所(普通合伙) 37278 | 代理人： | 庞庆芳 |
| 地址： | 321000 浙江省金华市婺城区迎*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因功能 终止子 蛋白 制备 载体结构 基因工程技术 关联 多克隆位点 操作平台 假阳性 构建 蛋白质 胁迫 应用 融合 | ||
【权利要求书】：
1.一种直接揭示基因功能的蛋白互作载体，其特征在于，包括cEYFP盒或nEYFP盒和终止子，其中，所述cEYFP载体结构为Sac1-EcoRI-XbaI-KpnI-BamHI-SalI-PstI-cEYFP盒-终止子-HindIII；nEYFP载体结构为：Sac1-EcoRI-XbaI-KpnI-BamHI-SalI-nEYFP盒-终止子-HindIII。
2.制备权利要求1所述的一种直接揭示基因功能的蛋白互作载体的方法，其特征在于，提供基础载体pCAMBIA1301，nEYFP/cEYFP与终止子通过overlap的方式连接到pMD18-T载体上，后通过酶切位点插入到pCAMBIA1301上，即可得到直接揭示基因功能的蛋白互作载体。
3.使用上述权利要求1或2提供的直接揭示基因功能的蛋白互作载体的方法，其特征在于，包括以下有效步骤：
A、构建上述权利要求1或2提供的直接揭示基因功能的蛋白互作载体；
B、将靶蛋白的启动子与开放阅读框，分别克隆至上述直接揭示基因功能的蛋白互作载体，使直接揭示基因功能的蛋白互作载体与靶蛋白融合；
C、对检测所需的植物进行相应的胁迫处理；
D、将B步骤融合好的直接揭示基因功能的蛋白互作载体进行转化处理；
E、侵染C步骤中胁迫处理好的植物，激光共聚焦观察，确定靶蛋白的互作情况。
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