[发明专利]检测气单胞菌的特异性引物对、试剂盒、应用、PCR检测方法在审

专利信息
申请号: 201910306296.2 申请日: 2019-04-17
公开(公告)号: CN109929938A 公开(公告)日: 2019-06-25
发明(设计)人: 王宇;黎慧;邵晨 申请(专利权)人: 浙江师范大学
主分类号: C12Q1/689 分类号: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
代理公司: 杭州华进联浙知识产权代理有限公司 33250 代理人: 李丽华
地址: 321004 浙江*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 特异性引物 下游引物 气单胞菌 上游引物 单胞菌 检测气 试剂盒 可用 水体 安全可靠性 种检测 土壤 制备 应用 养殖业 保证 检测
【权利要求书】:

1.一种检测气单胞菌的特异性引物对,其特征在于,包括上游引物Aer_F和下游引物Aer_R1组成的第一特异性引物对,或者包括上游引物Aer_F和下游引物Aer_R2组成的第二特异性引物对;其中,

所述上游引物Aer_F为:5’CTAATACCGCATACGCCCTAC3’,

所述下游引物Aer_R1为:5’ATGGCTGCATCAGGGTTT3’,

所述下游引物Aer_R2为:5’GGAAGCCACGTCTCAAGGA3’。

2.一种气单胞菌的PCR检测试剂盒,其特征在于,包括如权利要求1所述的第一特异性引物对或第二特异性引物对。

3.根据权利要求2所述的气单胞菌的PCR检测试剂盒,其特征在于,所述PCR检测试剂盒还包括模板DNA,所述模板DNA包括嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌、维氏气单胞菌中的至少一种气单胞菌的基因组DNA。

4.根据权利要求2所述的气单胞菌的PCR检测试剂盒,其特征在于,所述PCR检测试剂盒还包括10×扩增缓冲液、dNTP、MgCl2、Taq聚合酶和双蒸水。

5.一种如权利要求2~4任一项所述的气单胞菌的PCR检测试剂盒的应用,其特征在于,所述PCR检测试剂盒用于检测气单胞菌。

6.根据权利要求5所述的气单胞菌的PCR检测试剂盒的应用,其特征在于,所述气单胞菌包括嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌、维氏气单胞菌中的至少一种。

7.一种应用权利要求1所述的特异性引物对的气单胞菌的PCR检测方法,其特征在于,包括:

提取待测样品的气单胞菌的基因组DNA,作为模板DNA;

将所述模板DNA与特异性引物对、10×扩增缓冲液、dNTP、MgCl2、Taq聚合酶、双蒸水配制形成PCR反应体系,其中,所述特异性引物对为第一特异性引物对或第二特异性引物对;

所述PCR反应体系进行反应,得到扩增产物;

将所述扩增产物进行凝胶电泳,根据条带分析结果。

8.根据权利要求7所述的气单胞菌的PCR检测方法,其特征在于,所述气单胞菌包括嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、豚鼠气单胞菌、维氏气单胞菌中的至少一种。

9.根据权利要求7所述的气单胞菌的PCR检测方法,其特征在于,所述PCR反应体系的体积为10μL~50μL,其中,包括1.5mmol/L~2.5mmol/L的MgCl2,0.20mmol/L~0.30mmol/L的dNTP,0.1μmol/L~0.3μmol/L的特异性引物,0.5U~1.5U的Taq聚合酶,0.5μL~2μL的模板DNA,1μL~5μL的10×扩增缓冲液,余量为双蒸水。

10.根据权利要求7所述的气单胞菌的PCR检测方法,其特征在于,所述反应的程序为:94℃~98℃预变性2min~5min;

94℃~98℃变性10s~40s,55℃~65℃退火20s~45s,68℃~72℃延伸20s~90s,共25个~40个循环;

最后72℃延伸5min~15min。

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