[发明专利]一种抗人NT-proBNP多肽的单克隆抗体

说明书

本发明公开了一种抗人NT‑proBNP多肽的单克隆抗体，包括选择NT‑proBNP抗原决定簇多肽片段aa1和aa2、制备NT‑proBNP抗原决定簇多肽片段aa1与aa2、形成偶联蛋白aa1‑KLH‑aa2、用偶联蛋白aa1‑KLH‑aa2作为抗原免疫动物制备所述抗人NT‑proBNP多肽的单克隆抗体等步骤。本发明的生产过程所制备的偶联蛋白具有良好的蛋白表面活性和抗原性,便于筛选出特异性良好的单克隆抗体，本发明中的偶联蛋白能增加抗原决定簇的数量，从而增加单克隆抗体产生的种类，并提高后期单克隆抗体配对的可能性，本发明的制备过程简单、抗体亲和力高。本发明具有广阔的市场前景。

技术领域

本发明涉及抗体工程技术领域，具体涉及一种抗人NT-proBNP多肽的单克隆抗体。

背景技术

随着生活条件和医疗条件的提高，社会老龄化现象越来越显著，心力衰竭病人数逐年增加。心力衰竭(Heart Failure)是一种因心脏功能障碍而产生的体征与症状的临床综合征。虽然一些药物可延缓病情恶化，但除非进行心脏移植，否则心力衰竭是无法治愈的。心力衰竭早期诊断是当今医疗保健面临的最关键问题，越早开始治疗，对病人就越有利。然而，心力衰竭(尤其是在心衰早期)难于确诊的。心力衰竭的典型症状，如疲劳、呼吸急促、踝关节肿胀等都不具特异性，有些病情轻微的患者也没有表现出典型症状。初级医疗机构仅依赖临床标准作为诊断依据，诊断心力衰竭的假阳性率可高达50％。目前诊断心衰最常用有效的方法主要有超声心动图、放射核素显像和心核磁共振检查；但是日常实际诊断左心室功能衰竭时，上述检查手段没有一项是可以完全信赖，并具有良好的重现性的。因此，临床上急需一种客观、简单、科学的快速诊断方法，提高心衰患者的诊断率。研究表明脑钠肽(Brain natriuretic peptide，BNP)和氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro-brainnatriuretic peptide，NT-proBNP)浓度的升高对于心力衰竭的诊断具有非常高的敏感性，并能评估心功能损害程度，是诊断心力衰竭非常有效的生物标记物。

BNP是一种多肽类激素，主要由心室分泌，具有利钠、扩张血管、抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统的作用。研究显示，这类物质对于慢性心力衰竭及心脏功能不全的诊断具有良好的指导意义。BNP是由前脑钠肽元(preproBNP)通过蛋白酶解的方式形成的。preproBNP是在心肌细胞中合成的的多肽链，包含134个氨基酸残基，当1-26位信号肽被切掉后就形成包含108个氨基酸残基的脑钠肽(proBNP)。pro-BNP在心室受刺激时，裂解成有活性的BNP(32个氨基酸)和没有活性的NT-proBNP(76个氨基酸)。NT-proBNP和BNP等比例释放，二者在心血管系统疾病的诊断、治疗、监测和预后方面有着相似的临床应用。

NT-proBNP的生物半衰期是60-120分钟，相比BNP 20分钟的生物半衰期要长数倍，而且心力衰竭时NT-proBNP的升高幅度显著大于BNP，因而更利于检测。此外，NT-proBNP在血清和血浆中非常稳定，无需对样品进行预处理，可以采用常规血液样本的传送和处理方法。正常情况下，NT-proBNP含量几乎没有日间变异，因而可以随时取样检测；而且还不受患者体位及运动状况的影响。血浆NT-proBNP水平随心衰程度加重而升高。50岁以下的成人血浆NT-proBNP浓度450 pg/mL，诊断急性心衰的敏感性和特异性分别为93％和95％；50岁以上的人血浆浓度900 pg/mL，诊断心衰的敏感性和特异性分别为91％和80％。

通过与纽约心脏学会(New York heart association，NYHA)心功能分级比较，NT-proBNP更能真实反映心功能的变化。NT-proBNP水平与心力衰竭的严重程度相关，水平越高病变越严重，预后也越差。同时，NT-proBNP有利于在早期阶段或病变轻微阶段发现心衰。

随着心力衰竭病例的日益增多，开展和加强NT-proBNP检测对于诊断和防治心力衰竭，有很重要的意义。对于NT-proBNP的鉴定已经进行过相关研究及报道，WO93/24531