[发明专利]苦参碱作为免疫佐剂在制备胃癌树突状细胞疫苗中的应用

说明书

本发明提供苦参碱作为免疫佐剂在制备胃癌树突状细胞疫苗中的应用。用苦参碱干预制备的胃癌树突状细胞疫苗可以促进树突状细胞的成熟，促进T细胞增殖，以及诱导增强体外抗胃癌效应。因此该佐剂的应用可增强胃癌树突状细胞疫苗的效价。该佐剂可以在制备胃癌树突状细胞疫苗中使用。本发明提供了一种将传统中药制剂苦参碱作为免疫佐剂促进DC疫苗效能的方案，为肿瘤的防治提供新途径。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及苦参碱作为免疫佐剂在制备胃癌树突状细胞疫苗中的应用。

背景技术

胃癌(Gastric cancer，GS)是全球癌症死亡的第三大原因，每年有超过78.3万人死于胃癌，在东亚发病率最高。值得注意的是，大多数确诊患者已处于晚期，预后较差，中位生存期为3-5个月。

随着FDA首次批准前列腺癌树突状细胞(Dendritic cells，DCs)疫苗，这项技术正在成为一种有希望的抗肿瘤的生物免疫治疗方法。然而，DC疫苗的局限性限制了临床试验的有效性。DC成熟度低是影响DC疫苗效能的主要因素之一，为了优化DC疫苗的抗肿瘤反应，克服肿瘤微环境的免疫抑制作用，在给药前DC应达到完全成熟和活化。因此，在外周血CD14+单核细胞或CD34+造血干细胞体外培养中，优化促进DC成熟的方案是最常用的方法。DCs可以通过多种方式促进其成熟。在实验室中，TLR激动剂如LPS(TLR4)、poly IC(TLR3)和resiquimod(TLR7)等常用作DC激活剂。这些TLR激动剂不仅影响DC的功能状态，而且在肿瘤微环境中产生具有负免疫调节作用的MDSCs和Tregs。在临床，常用的是促炎症细胞因子组合，即包含TNFα、IL-1β、PGE2的混合制剂。该制剂能够诱导CD40、CD80、CD86、CCR7和MHC I、II类分子上调，但未能有效诱导IL-12p70。另电穿孔亦可诱导DC成熟，在iDCs中表达TLR4、CD40L和CD70。然而，目前对诱导DC成熟的最佳方法仍然缺乏共识。

近年来，传统中药制剂在免疫治疗领域受到广泛关注。越来越多的证据表明，某些中药影响与免疫应答相关的免疫细胞，如DCs。此外，这些中药可能影响DCs的关键功能，包括分化、成熟、抗原表达和细胞因子的产生。苦参碱是从苦参根中分离得到的生物碱。虽然苦参碱的抗肿瘤作用已被广泛报道，但其对DC的作用尚无人报道。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了苦参碱作为免疫佐剂在制备胃癌树突状细胞疫苗中的应用，苦参碱可以增强胃癌树突状细胞疫苗体外免疫治疗效果。本发明将苦参碱作为促进胃癌DC成熟、提高DC疫苗抗肿瘤作用的新策略。在DC促成熟阶段将苦参碱联合TLR激动剂LPS作用24小时接触可诱导DC成熟，促进T细胞增殖，并且可提高DC的抗原递呈能力，加强体外抗胃癌效能。从而提示在临床实践中加强自体DC疫苗效价在技术上是可行的。

本发明提供一种用于提高胃癌树突状细胞疫苗效价的免疫佐剂，所述免疫佐剂为苦参碱。

本发明提供苦参碱作为免疫佐剂在制备胃癌树突状细胞疫苗中的应用。

本发明提供上述免疫佐剂在提高树突状细胞成熟度中的应用。

本发明提供苦参碱作为免疫佐剂在诱导T细胞增殖中的应用。

本发明提供苦参碱作为免疫佐剂在增强体外针对胃癌的免疫治疗效能中的应用。

本发明提供胃癌树突状细胞疫苗的制备方法，包括以下步骤：

(1)在DC培养的第5天，将胃癌全抗原与DC细胞混合培养；

(2)在DC培养的第7天，加入100ng/ml LPS和60-240mg/ml苦参碱，恒温恒湿培养；

(3)药物干预24小时后即为制备成熟的胃癌树突状细胞疫苗。

作为优选，所述苦参碱的浓度为120-240mg/ml。