[发明专利]治疗糖尿病足的间质干细胞制剂及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种治疗糖尿病足的间质干细胞制剂，所述治疗糖尿病足的间质干细胞制剂包含：TSP4过表达的间质干细胞，所述TSP4过表达的间质干细胞的制备方法包括：以pCMV6‑TSP4质粒和FT106质粒载体设计引物，通过PCR扩增和DNA连接反应得到FT106‑TSP4‑GFP慢病毒表达质粒，然后采用慢病毒包装质粒psPAX2和pMD.2G共转染293T细胞得到FT106‑TSP4‑GFP慢病毒，在用获得的FT106‑TSP4‑GFP慢病毒感染所述间质干细胞，得到TSP4过表达的间质干细胞。本发明提供的制剂能促进血管生成和活化，从而提高制剂对糖尿病足的治疗效果。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种治疗糖尿病足的间质干细胞制剂及其应用。

背景技术

糖尿病足是指由于糖尿病血管病变、神经病变及其感染等综合因素，导致神经性病变使得下肢保护功能减退，大血管和微血管病变使动脉灌注不足致微循环障碍而引起足部疼痛、皮肤深溃疡甚至肢体坏疽的疾病状态。糖尿病足是糖尿病一种严重的并发症，是糖尿病患者致残，甚至致死的重要原因之一，不但给患者造成痛苦，而且给社会及家庭造成了沉重的医疗负担。

临床上用于治疗糖尿病足的方法有药物治疗、血管重建和介入手术，然而，糖尿病患者多年老体弱，常患有心脑血管等疾病，不能耐受手术搭桥等刺激，且血管病变多累及小动脉，部分患者缺乏远端动脉流出道，不具备行血管搭桥和介入治疗的条件。因此，目前糖尿病足的临床治疗仍然非常棘手，难以取得令人满意的疗效，常常导致截肢甚至危及病患生命。目前，在糖尿病足的治疗中，干细胞疗法已经成为最有发展前景的治疗策略，应用干细胞移植为糖尿病足缺血损伤组织修复和功能恢复提供了希望。间充质干细胞，是一种具有自我更新、高度增殖和多系分化能力的细胞群。间质干细胞已被证实是一类具有多向分化潜能的干细胞，可以在一定的诱导条件下分化为骨、软骨、脂肪、神经、心肌等，参与不同组织的修复，还能够促进血管生成，既可以分化成为血管内皮细胞和平滑肌细胞，直接形成新的血管，同时还可以通过旁分泌VEGF、Ang-I、Ang-II等多种血管生成因子来参与血管的新生过程。

但是，在实际应用中，由于间质干细胞在人体中的含量不高，例如：骨髓间质干细胞大约占据骨髓中单核细胞数量的0.001％至0.01％，在临床治疗中需要较大的采髓量，对患者年龄、身体条件、心理接受程度要求较高。且由于氧化应激、低氧等微环境改变使移植后间质干细胞的存活率非常低，新生血管形成速度慢等，极大地限制了间质干细胞在糖尿病足疾病中的治疗效果。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种治疗糖尿病足的间质干细胞制剂，旨在解决现有间质干细胞由于在人体中含量不高，存活率非常低，形成速度慢等缺陷，极大地限制了间质干细胞在糖尿病足疾病中的应用和治疗效果技术问题。

本发明实施例的另一目的在于提供一种治疗糖尿病足的间质干细胞制剂的应用。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种治疗糖尿病足的间质干细胞制剂，所述治疗糖尿病足的间质干细胞制剂包含：TSP4过表达的间质干细胞，所述TSP4过表达的间质干细胞的制备方法包括以下步骤：

获取pCMV6-TSP4质粒和FT106质粒载体，根据所述pCMV6-TSP4质粒的基因编码区序列设计用于扩增TSP4的第一引物对，根据所述FT106质粒载体的基因编码区序列设计用于扩增FT106的第二引物对；

分别以所述pCMV6-TSP4质粒和FT106质粒为模板，进行聚合酶链式反应扩增，分别扩增得到pCMV6-TSP4寡核苷酸链和FT106寡核苷酸链；

通过DNA连接反应将所述pCMV6-TSP4寡核苷酸链连接到所述FT106寡核苷酸链中，得到连接产物FT106-TSP4-GFP慢病毒表达质粒；