[发明专利]液相色谱串联质谱检测血浆中甲磺酸伊马替尼血药浓度的方法及检测试剂

说明书

本发明公开了一种液相色谱串联质谱检测血浆中甲磺酸伊马替尼血药浓度的方法及检测试剂，所述方法包括以下步骤：（（ⅰ）配制标准溶液；（ⅱ）配制内标溶液；（ⅲ）样本预处理；（ⅳ）标准曲线绘制；（ⅴ）测定血浆中甲磺酸伊马替尼血药浓度。所述检测试剂包括流动相A、流动相B、标准溶液和内标溶液。本发明提供了一种液相色谱串联质谱检测血浆中甲磺酸伊马替尼血药浓度的方法，该方法伊马替尼和内标物卡马西平能完全分离，且受内生物质杂质峰影响小，回收率和精密度高。

技术领域

本发明属于甲磺酸伊马替尼血药浓度的检测方法，具体涉及一种液相色谱串联质谱检测血浆中甲磺酸伊马替尼血药浓度的方法及检测试剂。

背景技术

甲磺酸伊马替尼（imatinib）是第一代的小分子络氨酸激酶抑制剂。甲磺酸伊马替尼是瞄准慢性髓系白血病(CML)致病原因的小分子靶向药物，同时是推荐用于治疗转移、复发、不可切除等胃肠间质瘤（GIST）的一线用药和术后辅助用药，但该药疗效和毒性个体差异大，如性别、药物代谢等，并且易受其他药物影响，进行血药浓度监测可保证疗效并预测、减轻毒性，改善患者生活质量、延长生存期。目前临床检验常用的检测技术主要基于免疫分析方法，但是免疫分析对小分子化合物的检测有先天缺陷。即使采用单克隆抗体，这些抗体对于小分子化合物的单个分子结构精确识别也存在困难。另外，大多数抗体在检测分子结构相似的化合物时，容易导致交叉反应，伊马替尼的代谢产物可能会干扰检测，产生假阳性检测结果。

LC-MS/MS法是临床检测中的金标准，与临床主要分析方法免疫法相比，其方法灵敏度高以及特异性高，同时试剂成本低廉、检测速度快、检测通量高。

发明内容

本发明是为了克服现有技术中存在的缺点而提出的，其目的是提供一种液相色谱串联质谱检测血浆中甲磺酸伊马替尼血药浓度的方法及检测试剂。

本发明的技术方案是：

一种液相色谱串联质谱检测血浆中甲磺酸伊马替尼血药浓度的方法，包括以下步骤：

（ⅰ）配制标准溶液

称取甲磺酸伊马替尼标准品，用甲醇溶解，配制成标准溶液；

（ⅱ）配制内标溶液

称取卡马西平，用甲醇溶解，配制成内标溶液；

（ⅲ）样本预处理

用移液器精密吸取卡马西平加入到血浆中，涡旋混匀后，用移液器吸取甲醇，将血浆的蛋白析出，涡旋震荡，充分萃取后，进行离心，离心后用针筒吸取上清液，用滤膜过滤，得到样品，并注入到进样瓶中，待分析；

（ⅳ）标准曲线绘制

配置不同浓度的标准溶液，每个浓度分别加入到含有血浆的离心管中，涡旋混匀；混匀后加入内标溶液，涡旋混匀，用移液器吸取甲醇，将血浆的蛋白析出，涡旋震荡，充分萃取后，进行离心，离心后用针筒吸取上清液，用滤膜过滤，样品注入到进样瓶中，用液相色谱串联质谱进样分析，以伊马替尼质量浓度为横坐标，伊马替尼与内标物的峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线；

所述液相色谱的分析条件为：

色谱柱：Agilent InfinityLab Poroshell 120 SB-C18(4.6*50mm)2.7-Micron；

流动相：流动相A为体积分数0.2%的甲酸，流动相B为乙腈；

流速：0.5ml/min；

进样量10ul；

检测波长282、272；

柱温35℃；