[发明专利]一种循环肿瘤细胞捕获装置及方法

说明书

本公开涉及肿瘤细胞捕获技术领域，具体涉及一种循环肿瘤细胞捕获装置及方法。本公开提供了一种循环肿瘤细胞的捕获装置，将上皮细胞粘附分子(EpCAM)、表皮因子生长受体(EGFR)的抗体修饰在包被有PDMS胶状物的留置针上进行肿瘤细胞的捕获。本公开通过血液循环泵中模拟体内环境，EGFR抗体捕获循环肿瘤细胞数在60左右，EpCAM捕获的循环肿瘤细胞数在55左右，而EGFR+EpCAM混合抗体捕获的细胞数约为130，大于两种抗体单独使用的捕获数量之和。多抗体联用技术可远远提高循环肿瘤细胞的捕获效率，减少循环肿瘤细胞的损失，为循环肿瘤细胞的捕获与检测奠定了基础。

技术领域

本公开涉及肿瘤细胞捕获技术领域，具体涉及一种采用EpCAM、EGFR混合抗体包被的肿瘤细胞捕获装置及循环肿瘤细胞捕获方法。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本公开的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

循环肿瘤细胞(CTC，CirculatingTumorCell)是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称，因自发或诊疗操作从实体肿瘤病灶(原发灶、转移灶)脱落，大部分CTC在进入外周血后发生凋亡或被吞噬，少数能够逃逸并锚着发展成为转移灶，增加恶性肿瘤患者死亡风险。因此早期发现血液中的CTC，对于患者预后判断、疗效评价和个体化治疗都有着重要的指导作用。

常用的循环肿瘤细胞检测方法包括：免疫细胞化学法(immunocytochemistry,ICC)利用染料或酶标记的循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)特异性抗体，通过检测标记抗体的染料或者酶，实现对肿瘤细胞的定性、定量和定位检测及分析；流式细胞术(flowcytometry,FCM)使不同细胞带上不同电荷，在偏转电场中对细胞进行偏转分离，完成细胞的分离和统计；聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)，基于血液中存在游离的CTCs的DNA，通过PCR技术对游离DNA进行特异性复制，通过检测DNA达到检测CTCs的目的；逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、荧光RT-PCR(fluorescent RT-PCR)、实时定量RT-PCR(real-time quantitativeRT-PCR)、巢式RT-PCR(nested RT-PCR)等技术。CellSearch检测系统是经美国食品及药品管理局(FDA)批准的唯一一个商用体外检测CTCs的方法。该系统检测全程封闭并自动化，检测结果最终以图像形式输出，系统挑选符合标准的细胞照片供检测者识别和计数。CellSearch系统提供的数据库可以根据患者被检查出的CTCs的数量，对癌症患者的总生存期和无进展生存期进行预测，为癌症患者后续治疗过程提供建议。通过肿瘤细胞表面分子标志物的抗原抗体识别作用对肿瘤细胞进行捕获可以有效提高对肿瘤细胞的识别及捕获灵敏度。CellSearch系统采用EpCAM修饰的磁球实现对患者血液中的循环肿瘤细胞的捕获。传统的CTC细胞捕获多限于对离体样本中肿瘤细胞的捕获，但是离体样本通常由于受到污染等原因导致检测结果的差异较大。发明人课题组在先专利CN103908306A中提供了一种基于留置针的循环肿瘤细胞在体捕获装置及方法，以EpCAM作为特异性捕获抗体，在输液过程中即可完成对血液中循环肿瘤细胞的捕获。

循环肿瘤细胞进入血液，会经历上皮间质转化，上皮间质转化是肿瘤发生侵袭转移的关键过程。具有极性的上皮表型细胞，在一定条件下发生细胞骨架重塑，转化成为更具强迁移能力的间质表型细胞。在此过程中，不仅细胞形态会发生改变，其表面分子标志物的表达也会发生变化，如细胞黏附分子(EpCAM)、细胞角蛋白的减少，而间质型标记物的增加，促进循环肿瘤细胞获得更强的侵袭能力，发生远处转移。由此可见循环肿瘤细胞发生上皮间质转化现象，往往会涉及上皮细胞及间质细胞的表达变化。发明人发现，采用EpCAM抗体作为识别材料对EpCAM高表达的循环肿瘤细胞可较好的识别，对于处于上皮间质转化的循环肿瘤细胞及间质型循环肿瘤细胞，其EpCAM表达较少，EpCAM抗体的识别能力及捕获效率大大降低。