[发明专利]促进脐带血T细胞体外扩增并维持高比例TSCM亚群的方法

说明书

本发明公开了一种促进脐带血T细胞体外扩增并维持高比例T_SCM亚群的方法，它通过将环黄芪醇与细胞因子IL‑7和细胞因子IL‑15联用，加入到T细胞的体外培养液中，促进T细胞扩增及维持高比例T_SCM亚群。本发明成功探究低浓度CAG联合IL‑7和IL‑15在体外长期促进脐带血来源T细胞扩增的同时，能够保持高比例的T_SCM细胞亚群。这种新的体外培养方式，为T细胞体外长期培养和包括CAR‑T细胞疗法在内的免疫疗法奠定实验基础。

技术领域

本发明属于细胞学领域，具体涉及一种促进脐带血T细胞体外扩增并维持高比例T_SCM亚群的方法。

背景技术

免疫细胞疗法是最具前景的肿瘤治疗手段，包括肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor-Infiltrating Lymphocytes,TIL)治疗、T细胞受体嵌合型T细胞(T cell ReceptorEngineered-T cell,TCR-T)治疗和嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen ReceptorEngineered T-cell,CAR-T)治疗等。其中TIL治疗是从患者肿瘤组织中分离得到肿瘤浸润淋巴细胞，体外扩增后，将具有肿瘤细胞杀伤活性的细胞群回输患者体内的治疗手段，是目前治疗黑色素瘤最有效的细胞疗法；而TCR-T治疗和CAR-T治疗都是通过基因改造技术提高T细胞特异性识别和杀伤肿瘤细胞的能力，在体外扩增后回输患者体内治疗血液恶性肿瘤，同时有实验研究正寻求新靶点以治疗实体瘤。TCR-T或CAR-T等免疫细胞疗法发挥杀伤肿瘤作用的细胞亚群都是CD8⁺T细胞活化后的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)，然而CTL细胞属于T细胞分化终末阶段的效应性T细胞(Effector T cell,T_E)，大量终末阶段的T_E细胞回输体内后，T细胞功能易衰竭，导致扩增能力有限，且并无免疫记忆维持能力，影响治疗效果。同时，有研究证明，干细胞样中心记忆性T细胞(stem cell-likecentral memory T cells,T_SCM)是一类不仅具有干细胞样自我更新和不断增殖能力特性，又具有记忆性T细胞的抗肿瘤作用和免疫记忆性的T细胞亚群。抗原刺激后可以产生大量T_E细胞。有研究表明CAR-T_SCM细胞的抗肿瘤作用优于其他T细胞亚群构建的CAR-T细胞。因此，在T细胞体外扩增的同时，保持高比例的T_SCM亚群可以提高以T细胞为基础的免疫细胞治疗的临床疗效。

环黄芪醇(Cycloastragenol，CAG)是从中药黄芪提取的主要皂苷成分，属于三萜皂苷类化合物，是黄芪甲苷的苷元。CAG具有免疫调节、抗炎、抗氧化、抗缺血性脑损伤、抗衰老等作用，例如：CAG通过抑制NLRP3炎性小体抑制炎症，预防小鼠心肌细胞纤维化；或通过抑制NF-κB活性作为炎症诱导的前列腺癌化学治疗的辅助治疗等。同时，CAG是中药提取化合物中现今唯一发现的端粒酶激活剂，能够有效激活神经元细胞的端粒酶活性，可以作为抑郁症的辅助治疗；或者通过影响端粒酶活性和klotho基因的表达延缓人胚胎肺成纤维细胞衰老，从而被认为具有抗衰老的作用。另外，有研究表明，高浓度(5、10、20μM)CAG可抑制CONA诱导的T细胞活化、增殖；低浓度(1μM)CAG会适度地延缓感染HIV病毒的人外周血来源的CD8⁺T淋巴细胞端粒的缩短，提高T细胞扩增的潜力。但低浓度CAG是否也能提高脐带血来源的T细胞增殖，目前未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：提供一种促进脐带血T细胞体外扩增的方法，另外，提供一种促进脐带血T细胞体外扩增时维持高比例T_SCM亚群的方法。

本发明的技术方案为：

一种促进脐带血T细胞体外扩增的方法，它通过将环黄芪醇与细胞因子IL-7和细胞因子IL-15联用，加入到T细胞的体外培养液中，促进T细胞扩增。