[发明专利]鸡抗沙门氏菌感染相关的miRNA及其应用

说明书

本发明提供了与鸡抗沙门氏菌感染相关的miRNA及其应用。本发明利用二代高通量测序技术，结合miRNA‑mRNA联合分析方法筛选到调控鸡沙门氏菌感染关键基因Tollip的miRNA gga‑miR‑1306‑5p，其在沙门氏菌易感组与对照组样本间显著性差异表达，能通过下调Tollip基因的表达，调控鸡沙门氏菌感染过程中促炎性因子的释放。本发明公开的这种miRNA可以作为鸡沙门氏菌感染相关的分子标记，通过检测该miRNA标志物，可对抗沙门氏菌感染鸡进行辅助育种，在遗传辅助抗病育种中具有重要的实际应用价值。

技术领域

发明属于鸡抗病遗传育种技术领域，涉及与鸡沙门氏菌感染相关的分子标记的筛选及应用，具体涉及调控沙门氏菌感染关键基因Tollip基因的miRNA及其应用。

背景技术

众所周知，肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)是唯一一种能够通过鸡蛋污染引起人类疾病的沙门氏菌血清型，严重威胁着人类食品及身体健康。尽管在鸡工业养殖产业中可以通过各种管理措施有效地控制沙门氏菌的污染，但近几年中关于沙门氏菌感染的报道屡见不鲜。另外，沙门氏菌对多种抗菌剂产生了严重的耐药性，对动物及人类疾病的预防及治疗产生了极大的威胁。为了进一步探究沙门氏菌感染机制、保护动物福利、降低禽类养殖产业经济损失、维护食品健康，急需开发有效地预防及治疗方法，开拓新的领域进行战略规划及未来方面的研究。

miRNA是一类非编码、单链小RNA分子(18～25个核苷酸)，在转录后水平通过降低基因表达调节多种生物学过程，分别在细胞增殖、分化、凋亡、肿瘤形成、炎症等生理过程中发挥重要的调控作用，多达60％的蛋白编码基因在一定程度上由miRNA调控。越来越多的证据显示，miRNA广泛参与了宿主免疫沙门氏菌感染过程，是人类和动物抗病过程中所不可缺少的调节因子。如果可以获得与宿主抗病相关的关键基因的miRNA作为分子标记，即可以加快抗病遗传选择的进展。

miRNA对动物疾病免疫方面的调控作用是通过调控其特定靶基因来实现，而仅仅借助于生物信息软件来预测靶基因，无疑将会是大海捞针。而通过某一特定时期、特定组织中miRNA和mRNA同时深度测序分析，根据miRNA和mRNA呈负相关表达的原理，并结合靶基因软件预测的结果，不但会大大缩小对目标miRNA靶基因的筛选范围；通过miRNA-mRNA联合分析，为鉴定调控像抗沙门氏菌感染这类复杂性状的关键基因和miRNA提供了一个全新手段。

综上所述，在当前家禽抗病难度较大且养殖成本急剧飙升的大背景下，利用分子标记辅助选择法对抗沙门氏菌感染这一复杂性状的相关机理进行探究，进而筛选出相关的调控因子及其关键的靶向基因，可以为了解宿主免疫沙门氏菌感染节省抗病系选育的成本。

发明内容

本发明的目的在于提供一种与鸡抗沙门氏菌感染相关的miRNA及其应用。

本发明通过高通量测序技术和miRNA-mRNA联合分析，筛选到调控鸡宿主沙门氏菌感染的分子标记gga-miR-1306-5p，其靶标基因为Tollip。该分子标记在沙门氏菌感染组与对照组之间显著性差异表达。进一步的分子生物学验证结果显示，gga-miR-1306-5p能通过抑制靶基因Tollip的表达，有效地调控下游促炎性因子的表达、释放。

基于此，本发明提供了与鸡抗沙门氏菌感染相关的miRNA分子标志物，其RNA序列如SEQ ID NO.1所示。

含有上述分子标志物的生物材料属于本发明的保护范围，所述生物材料为表达盒、转座子、载体、宿主细胞、转基因细胞系、工程菌。

本发明提供了上述miRNA分子标志物gga-miR-1306-5p，或gga-miR-1306-5p的表达促进剂，或上述生物材料在靶向调控Tollip基因表达量中的应用。本发明发现gga-miR-1306-5p的靶基因是Tollip基因，能够负向调控Tollip基因。