[发明专利]一种基于双水相体系仿生矿化过程固定化酶的方法

权利要求书

1.一种基于双水相体系仿生矿化过程固定化酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，制备甲氧基聚乙二醇-脲酶共聚物颗粒：

甲氧基聚乙二醇乙醛和脲酶按照质量比为1:1加入水中，形成混合物水溶液；在25 ℃条件下，静置100 h充分反应后真空干燥即得甲氧基聚乙二醇-脲酶共聚物颗粒；

步骤2，制备含过氧化氢酶双水相体系：

配置质量百分浓度为0.1～0.4 wt%的过氧化氢酶溶液，所述溶液的溶剂为10 mmol/L的Tris-HCl缓冲液；将葡聚糖和聚乙二醇加入到所述过氧化氢酶溶液中充分混合即得含过氧化氢酶双水相体系；所述含过氧化氢酶双水相体系中葡聚糖的质量百分浓度为8 wt%，聚乙二醇的质量百分浓度为8.5 wt%，葡聚糖分子量为500 kDa，聚乙二醇分子量为8 kDa；所述混合的条件为：在转速为40转/分的旋转分散器中分散2小时；

步骤3，制备固定化过氧化氢酶的方解石型碳酸钙：

在步骤2制备得到的含过氧化氢酶双水相体系中加入步骤1制备得到的甲氧基聚乙二醇-脲酶共聚物颗粒，在转速为2800转/分的旋涡混合器中震荡1 min得到混合溶液A；其中甲氧基聚乙二醇乙醛与混合溶液A的质量比为0.1～0.5 ：100，脲酶与混合溶液A的质量比为0.1～0.5 ：100；

制备含尿素和氯化钙的混合溶液B，其中氯化钙的浓度为0.5g/mL，尿素浓度为0.11 g/mL；所述混合溶液B的溶剂为10 mmol/L的Tris-HCl缓冲液；

用移液枪吸取混合溶液A于离心管中，加入混合溶液B，反应60～100 min，所述混合溶液A与混合溶液B的体积比为1:0.2～0.4；加入去离子水，离心机离心3 min，转速1000转/分，去除上清液；重复加入强碱溶液离心洗涤2～3次，即得固定化过氧化氢酶的方解石型碳酸钙。

2.根据权利要求1所述的一种基于双水相体系仿生矿化过程固定化酶的方法，其特征在于，所述双水相体系的粘度大于或等于200 mPa·s。