[发明专利]一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用

说明书

本发明涉及一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用。一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bsbc01，于2019年1月25日保藏于中国微生物菌种保藏中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏编号CGMCC No.17239。本发明首次公开了一种具有从青藏高原养殖区筛选获得的枯草芽孢杆菌，该菌较现有已知枯草芽孢杆菌具有显著的低氧耐受特性，作为动物饲料添加剂较现有枯草芽孢杆菌具有更好的应用效果。

技术领域

本发明涉及一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用，属于微生物技术领域。

背景技术

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，是芽孢杆菌属的一种，CAS号68038-70-0。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。有的菌株是α-淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系，故常作选育核苷生产菌的亲株或制取5'-核苷酸酶的菌种。

中国专利文献CN109161506A(申请号201811098313.X)公开了一株枯草芽孢杆菌及其应用，涉及生物防治植物病害领域。该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Yt1004，保藏编号为CGMCC No.14672。本发明还公开了含有上述菌株的生物防治制剂及其制备方法。该微生物制剂可以作为生物农药或生物肥料防治作物根结线虫病害，包括黄瓜根结线虫、西红柿根结线虫、大姜根结线虫、甜瓜根结线虫等一种或几种。

中国专利文献CN109337841A(申请号201811350457.X)公开了一株保藏编号为CGMCC NO.14220具有高效抑菌能力的枯草芽孢杆菌BYS2；所述的枯草芽孢杆菌BYS2能够耐高温、耐酸、耐胆盐，不仅能适应胃肠道内环境，而且对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌具有显著的抑制作用；枯草芽孢杆菌BYS2作为饲料添加剂，能提高动物体抗病原微生物感染能力即抗病能力(p<0.05)，显著促进肉鸡生长性能，提高养殖效益；同时具有安全、高效、益生的特点，对动物体无毒副作用。

本领域技术人员已熟知枯草芽孢杆菌可以通过消耗游离氧来实现竞争性抑制相关致病菌，从而实现灭杀致病菌的目的，因此，枯草芽孢杆菌的缺氧耐受性直接会影响枯草芽孢杆菌在特定环境下的抑菌效果，因此，寻找低氧耐受特性高的枯草芽孢杆菌是提高以枯草芽孢杆菌作为主要抑菌成分的饲料添加剂的主要途径之一。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一株枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用。

本发明技术方案如下：

一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bsbc01，于2019年1月25日保藏于中国微生物菌种保藏中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，菌种保藏编号CGMCC No.17239。

上述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bsbc01的培养方法，步骤如下：

(1)将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Bsbc01划线接种于LB固体培养基平板上35～38℃活化培养20～28h，制得活化菌株；

(2)将步骤(1)制得的活化菌株接种于LB液体培养基中，35～38℃、180～220rpm振荡培养16～20h，制得种子液；

(3)将步骤(2)制得的种子液按体积百分比5～8％的接种量接种到液体培养基中，37℃培养8h，制得初级发酵液；