[发明专利]一种复合微生物发酵菌的提取培养方法

权利要求书

1.一种复合微生物发酵菌的提取培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.原料准备：以新鲜水果和蔬菜为原料，榨汁过滤后得到果汁和蔬菜汁；

S2.密闭沤制：

1)将榨取的各种果汁和蔬菜汁混合成均匀的果蔬汁，平均分装在桶中，每桶的分装质量为80kg；

2)向每桶果蔬汁中加入优质糖8-12kg，使优质糖完全覆盖果蔬汁的上表面，形成一个密闭的隔离层；

3)除去隔离层以上桶内壁上的果蔬汁及水分，保持果蔬汁液面平衡稳定，盖上桶盖，保持桶内液面的稳定；

4)根据气温的不同将桶静置2-5天，保持内部稳定，并调节PH值为4-4.5，直到桶内液面发现有气泡，加入耐高糖酵母菌；

5)将桶放置到摇床上进行振荡培养，并调节PH值为3.5-4，直到果蔬汁表面有清液出现，且有效活菌数达到6-8×10⁸cfu/ml，形成基本的菌群母体；

S3.第一阶段扩培：分离出清液，加等量无菌水后，加气振荡培养，进行低糖扩培训练，直至有效活菌数达到2-4×10⁹cfu/ml，淘汰掉部分不耐低糖菌；

S4.第二阶段扩培：加入无菌水和糖蜜，通入空气振荡培养，进行高糖耐糖扩培训练，直至有效活菌数达到5-6×10⁹cfu/ml；

S5.第三阶段扩培：加入无菌水和糖蜜，分两次加气发酵48-60h，直至有效活菌数达到7-9×10⁹cfu/ml，停止加气发酵，将桶口密封备用，即制得复合微生物发酵菌。

2.根据权利要求1所述的一种复合微生物发酵菌的提取培养方法，其特征在于还进一步包括：

S6.复活发酵菌：密封桶置放时间较久后，要用时，加入10-20kg糖蜜，充分搅拌完全后，加氧气通气几天，直至有效活菌数达到7-9×10⁹cfu/ml，便可使复合微生物发酵菌复活。

3.根据权利要求1所述的一种复合微生物发酵菌的提取培养方法，其特征在于：所述步骤S2全程需要15-20天，所述步骤S3全程需要5-6天，所述步骤S4全程需要5-6天，所述步骤S5全程需要20-23天；

所述复合微生物发酵菌的提取培养周期为45-55天。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种复合微生物发酵菌的提取培养方法，其特征在于：所述步骤S1中作为原料的水果和蔬菜的选择条件为广泛选择跨各地域温带的果蔬和各种色彩的果蔬，且酸性强的果蔬含量占比不少于70％。

5.根据权利要求1-4任一项所述的一种复合微生物发酵菌的提取培养方法，其特征在于：所述步骤S2操作2)中的优质糖包括优质红糖和优质白糖，所述优质红糖和优质白糖的重量比为1:1；

所述步骤S2操作4)中当平均气温高于15℃时静置2-3天，当平均气温低于15℃时静置4-5天；所述耐高糖酵母菌的加入量为80-120g/桶。

6.根据权利要求1-3任一项所述的一种复合微生物发酵菌的提取培养方法，其特征在于所述步骤S3进一步包括：

1)将前期密闭沤制完成的果蔬汁用分离机进行渣汁分离，果渣去除，留取清液，再将清液平均分装在桶中，每桶的分装质量为35kg，并调节PH值为3.5-4；

2)每桶加入与清液等量的无菌水，充分搅拌完全后，再将桶放置到摇床上，在32-36℃下加气振荡培养22-26h，进行低糖扩培训练，直至有效活菌数达到2-4×10⁹cfu/ml，淘汰掉部分不耐低糖菌。

7.根据权利要求1-3任一项所述的一种复合微生物发酵菌的提取培养方法，其特征在于所述步骤S4进一步包括：

1)第一阶段扩培完成后，每桶中加入30kg无菌水和50kg糖蜜后，再加无菌水到九分满；

2)在32-36℃下通入空气振荡培养36-48h，在通入空气时盖上桶盖，保持进气管不要下垂，进行高糖耐糖扩培训练，直至有效活菌数达到5-6×10⁹cfu/ml。