[发明专利]一种pCzn1 -gC融合蛋白及其应用

说明书

本发明提供一种pCzn1‑gC融合蛋白及其应用，所述蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明所述pCzn1‑gC融合蛋白具有于PRV‑gC蛋白相同的生物学活性，包被于ELISA板可检测猪血液中PRV‑gC蛋白抗体，PRV‑gC蛋白抗体可阻止PRV病毒与靶细胞的黏附，因此，本发明成果能检测猪血液中PRV‑gC蛋白抗体，进一步评定猪伪狂犬病疫苗免疫效果及猪抗PRV感染的能力。并且，pCzn1‑gC融合蛋白容易表达，大大降低了表达生产成本，可用于商品化生产及推广使用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种pCzn1 -gC融合蛋白及其应用。

背景技术

伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的多种家畜和野生动物以发热、奇痒（猪除外）、繁殖障碍、脑脊髓炎为主要症状的一种高度接触性传染病。世界卫生组织将其列为B类动物传染病，我国也将其列为二类动物传染病。猪是PRV的天然宿主，该病对猪危害性大，具有高度隐性感染的特点，可引起持续性感染，特别是耐过的母猪常呈潜伏感染，长期带毒。尽管当前临床上已广泛使用了PRV疫苗，但2011年以来，许多规模化猪场爆发了PRV流行，主要表现为猪群gE抗体阳性率显著升高，发病母猪群流产、仔猪神经症状和死亡率高等典型伪狂犬病症状。随后，该病在我国多地规模化猪场相继爆发和流行。

PRV为线形双股DNA病毒，基因组大小约为143kb，包括70多个开放性阅读框，可以编码70～100种病毒蛋白，基因组G+C含量在疱疹病毒中最高达73%。病毒粒子最外层是病毒囊膜，囊膜上镶嵌有病毒编码的囊膜蛋白，大多是糖蛋白，在PRV感染细胞时介导着病毒与细胞之间的相互作用，并对病毒在细胞之间的扩散发挥着重要的作用，也是动物机体的免疫系统识别的主要靶抗原。其中有11 种糖蛋白，分别命名为gB(gIl)、gC(gⅢ)、gD(gp50)、gE(gI)、gG(gx)、gH、gI(gp63)、gK、gL、gM和gN。

gC糖蛋白是介导PRV病毒与靶细胞的黏附所必须，其表面的3个肝素结合区域(HBDs)是gC糖蛋白N端的抗体结合区域(44～290氨基酸)的一部分，用gC特异性抗体结合该区域可干扰病毒的黏附作用。对国内新分离毒株研究发现，gC糖蛋白氨基酸序列在ABD区域均存在8个连续氨基酸的插入，这可能会改变该区的环状结构，从而影响gC抗体与其有效结合，这可能也是造成Bartha株疫苗对当前PRV流行株免疫效果低下的原因之一。目前，养猪生产临床上使用的猪伪狂犬病血清学检测试剂盒只有针对gE和gB抗体检测，亟需研发生产一种能检测猪血液中PRV-gC蛋白抗体的试剂及方法，用以评定猪伪狂犬病疫苗免疫效果及猪抗PRV感染的能力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种pCzn1 -gC融合蛋白及其应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种pCzn1 -gC融合蛋白，所述蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

一种编码所述蛋白的基因，其序列如SEQ ID NO.2所示。

所述的pCzn1 -gC融合蛋白在制备检测猪血液中PRV-gC蛋白抗体试剂中的应用。

本发明的优点在于：

本发明所述pCzn1 -gC融合蛋白具有于PRV-gC蛋白相同的生物学活性，包被于ELISA板可检测猪血液中PRV-gC蛋白抗体，PRV-gC蛋白抗体可阻止PRV病毒与靶细胞的黏附，因此，本发明成果能检测猪血液中PRV-gC蛋白抗体，进一步评定猪伪狂犬病疫苗免疫效果及猪抗PRV感染的能力。并且，pCzn1 -gC融合蛋白容易表达，大大降低了表达生产成本，可用于商品化生产及推广使用。

附图说明

图1 PCR扩增结果，M:Marker；Line1:PCR扩增产物；Line2:空白对照。