[发明专利]一种提高粉粒几丁质对酶蛋白的吸附能力的方法及其应用

权利要求书

1.一种几丁质纳米纤维在酶的固定介质中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

第一步，含几丁质结合域ChBD的融合蛋白的制备

从Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1中扩增ChBD基因片段，并合成绿色荧光蛋白GFP基因，构建重组质粒pET29a-chbd-gfp，将其导入大肠杆菌BL21(DE3)，诱导表达后，收取菌体，裂解后，即为ChBD-GFP重组蛋白粗酶液；

第二步，将几丁质纳米纤维加入粗酶液至几丁质终浓度为1％-4％后，在温度4-37℃、pH 5.0-8.0条件下进行蛋白的吸附，吸附时间2-30min，即得固定化酶；其中，所述几丁质纳米纤维的制备方法，具体步骤如下：

步骤1，几丁质粉末的筛选

筛选粒径大小为60-120目的粉粒几丁质；

步骤2，几丁质悬浮液的制备

将粉粒几丁质用纯水洗涤2-5次后，60-85℃下烘干，重悬于蒸馏水中得质量分数为1-4％的几丁质悬浮液；

步骤3，几丁质纳米纤维的制备

将几丁质悬浮液以10-20L/h的进料速率通过高压均质机，压力为200-800bar，循环1-9次后得几丁质纳米纤维。

2.根据权利要求1所述的几丁质纳米纤维在酶的固定介质中的应用，其特征在于，步骤1中几丁质粉末的来源为小龙虾虾壳或蟹壳中一种或两种混合。

3.根据权利要求1所述的几丁质纳米纤维在酶的固定介质中的应用，其特征在于，包括以下步骤：第二步中蛋白吸附的温度为4℃，pH6.8， 搅拌速度为200rpm。

4.根据权利要求1所述的几丁质纳米纤维在酶的固定介质中的应用，其特征在于，包括以下步骤：第二步中吸附过程中控制pH所用的缓冲液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。