[发明专利]靶向朱砂叶螨脱皮激素受体基因EcR的dsRNA及应用

说明书

本发明公开了一种靶向朱砂叶螨脱皮激素受体基因EcR的dsRNA及应用，由SEQ ID No.6所示的核苷酸序列和其反向互补序列组成的双链RNA。本发明通过合成特异性dsRNA，利用饲喂法将其导入朱砂叶螨体内，并结合基因表达量检测、表型观察等实验方法证实干扰朱砂叶螨蜕皮激素受体基因的表达，可以有效阻断朱砂叶螨的发育过程，具有显著的致死效应，将其作为RNAi靶标具有较高的应用价值。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种靶向朱砂叶螨脱皮激素受体基因EcR的dsRNA及应用。

背景技术

RNAi(RNA interference)是指由特异dsRNA/siRNA/miRNA引起的靶基因mRNA分解的现象。因为可导致目标基因无法指导蛋白的合成，该现象也被称作基因沉默。由于利用RNAi沉默某些关键基因的表达可起到致死的效果，将其应用于田间防控是目前新型有害生物防控方法的发展方向。对基于RNAi的防控方法来说，靶基因的选择至关重要，理想的靶基因在对目标生物有良好致死效果的同时，还需具有较高的特异性，即对天敌和哺乳动物等非靶标生物安全。

朱砂叶螨别名棉红蜘蛛、棉叶螨、红叶螨，是一种重要的农业害螨，寄主广泛，可为害蔬菜、棉花、花卉、水果等多种经济作物。朱砂叶螨的防控多年来一直以施用化学农药为主，但是由于该螨具有世代周期短，繁殖能力强，可孤雌生殖等特点，导致田间防控过程中朱砂叶螨的抗药性发展十分迅速，是目前抗性问题最为严重的节肢动物之一。研发新型防控技术是缓减朱砂叶螨田间抗性、提高防控效果、降低田间化学农药施用量的一个重要途径。由于螨类个体微小，大多数体长不到1mm，直接注射难度较大。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：如何提供一种防治朱砂叶螨的dsRNA，解决朱砂叶螨对化学药产生抗药性而难以防治的问题。

本发明的技术方案为：一种防治朱砂叶螨的dsRNA，由SEQ ID No.6所示的核苷酸序列和其反向互补序列组成的双链RNA。

一种防治朱砂叶螨的dsRNA的制备方法，步骤如下：

1)提取朱砂叶螨的总RNA；

2)将总RNA反转录成cDNA作为扩增dsRNA序列的模板；

3)使用SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的引物，利用PCR扩增靶向朱砂叶螨EcR基因的片段，PCR反应体系和条件如下所示：

PCR反应体系

4)反应完成后进行琼脂糖凝胶电泳，然后用试剂盒回收电泳产物，以回收的电泳产物作为模板，用转录试剂盒合成dsRNA，合成的dsRNA由SEQ ID No.6所示的核苷酸序列和其反向互补序列组成。

由SEQ ID No.6所示的核苷酸序列和其反向互补序列组成的dsRNA在以下至少一种上的应用：

1)防治朱砂叶螨或制备防治朱砂叶螨的产品；

2)促进朱砂叶螨死亡或制备促进朱砂叶螨死亡的产品；

3)抑制朱砂叶螨生长或制备抑制朱砂叶螨生产的产品；

4)抑制朱砂叶螨体EcR基因的表达或制备抑制朱砂叶螨体EcR基因表达的产品。

通过寄主叶片进行饲喂或构建表达能由SEQ ID No.6所示的核苷酸序列和其反向互补序列组成的dsRNA的转基因植株来导入朱砂叶螨体内，从而达到防治朱砂叶螨的目的。