[发明专利]一种由大型真菌子实体转接菌种的制备方法

说明书

本发明公开了一种由大型真菌子实体转接菌种的制备方法，首先将野外生长旺盛的幼嫩大型真菌子实体冷藏带回，用蒸馏水小心冲洗后用75％酒精均匀的喷洒于子实体进行消毒，然后沿菌柄对半掰至菌盖分成两半，用灭菌的锋利刀片切取大小约为0.5cm×0.5cm的菌柄和菌盖组织，将其转接到添加链霉素的马铃薯固体培养基PDA上，最后将已接种的培养皿置于恒温培养箱中，保持黑暗条件于25℃培养7～10天后观察菌丝萌发情况，挑取远离杂菌污染点的白色绒毛状菌丝(含培养基)至新制备的PDA培养基中作扩大培养，至获得单一菌种。本发明利用添加链霉素的PDA培养基和组织分离法进行子实体转接菌种，进而得到纯化菌种，操作简单、省时省力。

技术领域

本发明涉及一种菌种的制备技术，尤其涉及一种由大型真菌子实体转接菌种的制备方法。

背景技术

大型真菌是指能形成肉质或胶质子实体的一类高等真菌，是自然界中物种多样性最为丰富的生物群。其作为生态系统中的主要分解者，在生态系统的能量和物质循环中起着决定性的作用，除此之外，很多大型真菌属于食药用真菌，具有较高的营养价值和药用价值。随着现代生物技术的不断深入，逐渐从大型真菌的形态特征和组织结构等宏观研究上升到分子生物学领域。因此，由大型真菌子实体转接获得纯净真菌菌种成为关键技术环节。

目前获得大型真菌子实体转接的方法有组织分离法、孢子分离法、菇木分离法等。其中，组织分离法是通过子实体的部分组织来分离获取纯菌种，该种方法所获得的纯菌种遗传性状稳定，后代不易发生变异，是选育优良菌种的简便有效方法。但大部分大型真菌子实体中菌丝的含量相对较少，且在转接过程中极易受到细菌的污染，这严重影响了菌种分离的成功率。

发明内容

本发明的目的是提供一种由大型真菌子实体转接菌种的制备方法，对大型真菌子实体样品进行转接后纯培养其真菌菌丝，大大提高了大型真菌子实体纯培养的成功率。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的由大型真菌子实体转接菌种的制备方法，包括步骤：

(1)大型真菌子实体灭菌：将于野外获取的大型真菌子实体冷藏带回，用蒸馏水冲洗后用75％酒精均匀的喷洒于子实体进行消毒；

(2)接种：沿菌柄对半掰至菌盖分成两半，用灭菌的锋利刀片切取小块菌柄和菌盖组织，将其转接到添加链霉素的马铃薯固体培养基PDA上；

(3)分离纯化：于25℃恒温培养7～10天观察菌丝萌发情况，挑取白色绒毛状菌丝与培养基一起至新制备的PDA培养基中作扩大培养，至获得单一菌种。

由上述本发明提供的技术方案可以看出，本发明实施例提供的由大型真菌子实体转接菌种的制备方法，快速、经济、有效，分离菌种成功率高，适用于大多数的大型真菌，且技术简单，易于普及。

附图说明

图1为本发明实施例提供的由大型真菌子实体转接菌种的制备方法的子实体切取菌块示意图。

图2为本发明实施例提供的由大型真菌子实体转接菌种的制备方法的培养基中菌块放置示意图。

具体实施方式

下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。本发明实施例中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。

本发明的由大型真菌子实体转接菌种的制备方法，其较佳的具体实施方式是：

包括步骤：

(1)大型真菌子实体灭菌：将于野外获取的大型真菌子实体冷藏带回，用蒸馏水冲洗后用75％酒精均匀的喷洒于子实体进行消毒；