[发明专利]一种仿刺参葡聚糖结合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明属于分子生物学领域和基因工程技术领域，具体公开了一种仿刺参葡聚糖结合蛋白及其制备方法和应用。本发明利用体外重组表达技术首次获得了仿刺参葡聚糖结合蛋白AJ‑GBP，仿刺参葡聚糖结合蛋白(AJ‑GBP)优选为序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列所示。该重组蛋白对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、藤黄短小杆菌和鳗弧菌具有凝集作用，对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、藤黄短小杆菌和鳗弧菌具有抑制作用，在开发新型广谱抗菌药物开发和饲料添加剂等方面具有潜在应用价值。

技术领域

本发明属于分子生物学和基因工程技术领域，具体涉及一种仿刺参葡聚糖结合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

仿刺参(Apostichopus japonicus)属棘皮动物门(Echinodermata)，海参纲(Holothuroidea)，楯手目(Aspidochirotida)，刺参科(Stichopodidae)，素有“海中人参”的美誉，具有很高的营养价值和医药价值。其在我国山东、辽宁和河北附近海域分布较为广泛。近年来，随着人们社会生活条件的提高和健康意识的增强，仿刺参市场需求量逐年增加，不断刺激养殖规模加大，仿刺参因此成为我国水产养殖业中单一产值最大的养殖品种。但是养殖过程中遇到的病害问题一直是困扰产业进一步发展的重要制约因素。而所使用化学药物，如二氧化氯、高锰酸钾、福尔马林及抗生素等进行治疗，对仿刺参在不同程度上都有一定的毒性作用。因此利用生物技术的手段进行疾病防治越来越引起人们的重视。

天然抗菌物质广泛存在于动植物中。目前，从动植物中分离的抗菌物质主要有生物碱、萜类、黄酮、多酚、多糖、有机酸、多肽、蛋白等，不同的活性成分，其结构组成不同，抗菌抑菌作用机制也不同。其中，抗菌蛋白是由多种生物细胞特定基因编码经外界条件诱导产生的一类具有广谱抗细菌、真菌、病毒、原虫、抑杀肿瘤细胞等活性作用的大分子蛋白质。然而，发明人发现，目前针对较易合成获得的小分子抗菌肽研究较多，而对大分子抗菌蛋白研究较少，特别是基于仿刺参制备相关抗菌蛋白的研究鲜有报道，不利于仿刺参产品的质量安全以及相关食品产业的健康发展。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种仿刺参葡聚糖结合蛋白及其制备方法和应用。通过对仿刺参β-1,3-葡聚糖结合蛋白的研究，为寻找新的仿刺参病害防控、良种选育的策略提供思路，有利于促进我国仿刺参养殖业的健康、可持续发展。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的第一个方面，提供一种仿刺参葡聚糖结合蛋白，所述仿刺参葡聚糖结合蛋白AJ-GBP的氨基酸序列与SEQ ID NO.1具有90％以上(含90％)序列同源性；更优选的，所述仿刺参葡聚糖结合蛋白AJ-GBP的氨基酸序列为SEQ ID NO.1。

本发明的第二个方面，提供了编码上述氨基酸序列的DNA分子。

进一步的，本发明提供一种编码SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的DNA分子具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.2具有至少90％的序列同源性，且能够表达SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的核苷酸序列。

本发明的第三个方面，提供含有编码所述仿刺参葡聚糖结合蛋白的氨基酸序列的DNA分子的重组表达载体、转基因细胞系统或转基因重组菌。

本发明的第四个方面，提供所述的DNA序列、所述重组表达载体、转基因细胞系统或转基因重组菌在制备仿刺参葡聚糖结合蛋白AJ-GBP中的应用。

本发明的第五个方面，提供一种葡聚糖结合蛋白AJ-GBP的制备方法，包括如下步骤：

以仿刺参cDNA为模板，用引物F1和R1进行PCR扩增；