[发明专利]一种用于水产品中砷形态检测的样品前处理方法及其应用

说明书

本发明公开了一种用于水产品中砷形态检测的样品前处理方法及其应用，该方法包括以下步骤：(1)将蛋白酶溶解于稀盐酸中，得到提取液；(2)除去水产动物的骨骼和内脏，将剩余的组织匀浆；(3)称取匀浆后的样品，加入提取液，涡旋、超声，将超声后的样品提取物置于恒温培养箱中37℃过夜，将样品提取物8000rpm离心，得到样品提取上清液；(4)将样品提取上清液用0.22μm的滤膜过滤，得到样品提取溶液，用于后续砷形态检测。以酶解提取方式处理水产动物样品，实现高效提取，同时保证前处理过程中各种砷形态不发生转化或损失，避免了基质干扰，提高了各种砷形态的回收率，确保砷形态测定的准确性。

技术领域

本发明涉及元素形态分析领域，尤其涉及一种用于水产品中砷形态检测的样品前处理方法及其应用。

背景技术

近几十年来，随着城市化建设和工业化的快速发展，带来越来越多的的化学污染，严重影响了我们周围的环境，破坏了生态系统。元素污染是环境污染的一种，其中重金属砷带来的污染引起越来越多学者的关注，砷有很多种形态，可以分为无机砷和有机砷，无机砷主要是三价砷和五价砷，有机砷有很多种如：砷甜菜碱、二甲基砷、砷胆碱、一甲基砷、阿散酸、卡巴砷、硝苯砷酸、4-羟基苯砷酸、洛克沙砷等。砷的生物毒性和砷的形态有关，砷的毒性由于形态的不同，毒性相差几个数量级，无机砷的毒性较强，具有致癌性，三价砷的毒性最强，五价砷的毒性其次；有机砷的毒性较弱，经常被认为是低毒或者是无毒。

水产品含有丰富的容易被人体所吸收的营养物质，是一种日常大量食用的食品，环境中的砷可以通过食物链到达水产品内，通过食物链到最终达人体内，对人的身体健康造成影响，由于不同砷形态对人体毒性的不同，所以为确保食品安全，则不仅需要测定各类水产品中砷总量，而且需要测定其中各种形态的分布，以便科学评估其影响范围和程度，对其存在的危害因素进行有效控制。

砷形态分析的前处理均需要提取步骤，与常规的总砷含量测量方法不同，形态分析中由于要保证各种形态不发生转化，所以不能对样品采取剧烈的消解方法，只能采取相对温和的提取方法。国家相关标准GB5009.11-2014《食品安全国家标准食品中总砷及无机砷的测定》，并于2016年3月21日实施，首次提出了形态分析方法，无机砷的测定第一法：液相色谱-原子荧光光谱法(HPLC-AFS)；第二法：液相色谱-电感耦合等离子质谱法(HPLC-ICP-MS)。上述标准中，均是使用稀硝酸对样品中无机砷进行提取后，以液相色谱进行分离，分离后的目标化合物进入AFS或ICP-MS中进行测定。但水产品中含有多种有机物，前处理的过程中容易损失或转化同时还存在基质干扰等问题，导致某些砷形态的回收率偏低，影响砷形态测定的准确性。标准中提供的前处理方法仅适用于无机砷形态的检测，在检测有机砷时，易造成砷形态的转化，导致检测不准确。

发明内容

本发明提供了一种用于水产品中砷形态检测的样品前处理方法及其应用，以解决前处理的过程中容易损失或转化同时还存在基质干扰等，导致某些砷形态的回收率偏低，影响砷形态测定的准确性的问题。

第一方面，本发明提供的用于水产品中砷形态检测的样品前处理方法，包括以下步骤：

(1)将蛋白酶溶解于稀盐酸中，得到提取液。

(2)除去水产动物的骨骼和内脏，将剩余的组织匀浆。

(3)称取匀浆后的样品，加入提取液，涡旋、超声，将超声后的样品提取物置于恒温培养箱中37℃过夜，将样品提取物8000rpm离心，得到样品提取上清液。

(4)将样品提取上清液用0.22μm的滤膜过滤，得到样品提取溶液，用于后续砷形态检测。

可选地，所述蛋白酶包括pepsin、trypsin或protease。

优选地，所述蛋白酶为protease。

优选地，步骤(1)为：称取4㎎蛋白酶溶解于0.75mL 0.5％HCl，得到提取液。