[发明专利]一种HPLC-ICP-MS联用测定虾中11种砷形态的方法

说明书

本发明公开了一种HPLC‑ICP‑MS联用测定虾中11种砷形态的方法，(1)配制标准储备液和标准工作溶液；(2)配制蛋白酶提取液；(3)制备样品提取溶液；(4)制备样品加标溶液；(5)配置两种不同浓度的碳酸铵溶液作为流动相；(6)将标准工作溶液通过自动进样器注入高效液相色谱仪中，采用梯度洗脱的方式对11种砷形态进行分离，再用电感耦合等离子质谱仪对11种砷形态进行分析，得到每种砷物种的标准曲线；(7)采用梯度洗脱的方式对样品提取溶液和样品加标溶液中11种砷形态进行分离，再用电感耦合等离子质谱仪对11种砷形态进行检测，采用保留时间匹配和样品加标匹配相结合的方法，确定样品中砷形态的种类和含量。

技术领域

本发明涉及元素形态分析领域，尤其涉及一种高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)联用测定虾中11种砷形态的方法。

背景技术

近几十年来，随着城市化建设和工业化的快速发展，带来越来越多的的化学污染，严重影响了我们周围的环境，破坏了生态系统。元素污染是环境污染的一种，其中重金属砷带来的污染引起越来越多学者的关注，砷有很多种形态，可以分为无机砷和有机砷，无机砷主要是三价砷和五价砷，有机砷有很多种如：砷甜菜碱、二甲基砷、砷胆碱、一甲基砷、阿散酸、卡巴砷、硝苯砷酸、4-羟基苯砷酸、洛克沙砷等。

砷的生物毒性和砷的形态有关，砷的毒性由于形态的不同，毒性相差几个数量级，无机砷的毒性较强，具有致癌性，三价砷的毒性最强，五价砷的毒性其次；有机砷的毒性较弱，经常被认为是低毒或者是无毒。目前国际组织IARC、FAO、WHO和EU发布的信息公布了砷的毒性和致癌作用，但是却没有具体规定每一种砷形态毒性及限量的法律依据。一般是对总砷的限量，缺乏每一种砷形态的限量范围。其中一个主要的原因是缺乏一种可以同时对多种砷形态进行准确定量的方法。目前，高效液相色谱(HPLC)联用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)已经成为元素形态分析最为准确、快捷、有效和常用的方法，液相色谱可以有效的对元素形态进行分离，同时ICP-MS可以快速而准确的对元素的无机和有机形态进行定量检测，与传统的原子光谱相比具有较低的检出限。

虾含有丰富的容易被人体所吸收的营养物质，是一种日常大量食用的食品，在世界上每天需要消耗大量的虾及虾制品，环境中的砷可以通过食物链到达虾体内，通过食物链到最终达人体内，对人的身体健康造成影响，由于不同砷形态对人体毒性的不同，所以对于虾不应当只是研究总砷的含量，而是应当研究虾中含有的砷形态，确定其含有砷形态的种类及其含量，是开展后续食品安全风险评估的基础。目前对于砷形态检测的研究很多，但是由于色谱柱和流动相的限制，检测通量有限，一般只能检测其中有限的几种，容易造成砷形态的误认。

发明内容

本发明提供了一种HPLC-ICP-MS联用测定虾中11种砷形态的方法，以解决由于色谱柱和流动相的限制，导致的砷形态检测检测通量有限，容易造成砷形态的误认的问题。

本发明提供的HPLC-ICP-MS联用测定虾中11种砷形态的方法，包括以下步骤：

(1)以砷甜菜碱、二甲基砷、亚砷酸、砷胆碱、一甲基砷、砷酸、4-硝基苯基胂酸、洛克沙砷、阿散酸、卡巴胂、对羟基苯胂酸的标准物质混合配制标准储备液，将标准储备液稀释成不同浓度梯度的标准工作溶液。

(2)配制提取液，称取4㎎蛋白酶溶解于0.75mL 0.5％HCl。

(3)剪掉虾头和虾尾，剥除虾壳，挑去虾线，将剩余的虾肉组织匀浆，称取匀浆后的样品0.5g于15mL的塑料离心管中，加入0.75mL提取液，用超纯水将样品定容至5mL，样品提取物涡旋，超声15min，将超声后的样品提取物置于恒温培养箱中37℃过夜，将样品提取物8000rpm离心，取上清液用0.22μm的滤膜过滤，得到样品提取溶液。