[发明专利]高效异源表达碱性蛋白酶的基因工程菌及其构建方法

权利要求书

1.一种高效异源表达碱性蛋白酶的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是利用核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的启动子与信号肽组合与克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶基因aprE构建重组表达载体，并转入枯草芽孢杆菌宿主WB600中，最终电转到解淀粉芽孢杆菌CGMCC No.11218中，获得重组基因工程菌。

2.如权利要求1所述高效异源表达碱性蛋白酶的基因工程菌，其特征在于，所述表达载体为pWB980。

3.权利要求1或2所述基因工程菌的构建方法，包括如下步骤：

1) 合成核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的启动子和信号肽组合P_ly-2+SP_Vpr；

2) 以克劳氏芽孢杆菌基因组为模板，根据GenBank : FJ940727.1克隆得到碱性蛋白酶基因aprE；

3) P_ly-2+SP_Vpr与aprE片段经相同酶切后连接，连接产物纯化后克隆到pWB980表达载体上，转入枯草芽孢杆菌WB600细胞中构建重组菌；

4) 提取出步骤3的重组菌的质粒，电转入解淀粉芽孢杆菌CGMCC No.11218中构建重组菌。

4.权利要求1或2所述基因工程菌用于发酵生产碱性蛋白酶的用途。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述基因工程菌于37 ℃，220 r/min发酵培养，发酵液中重组碱性蛋白酶的酶活达到20000 U/mL。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述发酵所用的发酵培养基组成：玉米粉64g/L，豆饼粉40 g/L，磷酸氢二钠4 g/L，磷酸二氢钾0.3 g/L，高温淀粉酶0.7 g/L。