[发明专利]日本血吸虫eIF4A基因的siRNA及其应用

说明书

本发明公开了日本血吸虫真核翻译起始因子eIF4A基因的siRNA，其含有与日本血吸虫eIF4A基因的靶序列杂交的核苷酸序列，所述靶序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3所示序列。本发明还公开了日本血吸虫eIF4A基因的siRNA的应用。本发明日本血吸虫eIF4A基因的siRNA，可明显抑制SjeIF4A基因的转录，并能诱导小鼠获得20.63％(P0.05)的减虫率和31.21％(P0.01)的肝脏减卵率，适用于制备治疗血吸虫病的药物。

技术领域

本发明涉及分子生物学和生物医药技术领域，尤其涉及一种日本血吸虫eIF4A(真核翻译起始因子4A)基因的siRNA及其应用。

背景技术

日本血吸虫病是我国南方地区广泛流行且严重危害人畜健康影响社会经济发展的人兽共患寄生虫病。自上世纪50年代以来我国血吸虫病防治取得了巨大成就，但是由于中间宿主钉螺难以消灭及血吸虫重复感染现象严重，该病在我国长江中下游及以南地区仍然是重要的公共卫生问题之一。吡喹酮以其高效、低毒、使用方便、价格低廉等优点得以在血吸虫病临床治疗和防治工作中得到广泛应用。然而，近年国外学者报道了曼氏血吸虫的吡喹酮抗性虫株，国内学者已关注日本血吸虫对吡喹酮敏感性改变的现象。这说明有必要寻找新的治疗或预防血吸虫病的药物。

真核翻译起始因子eIF4A(eukaryotic initiation factor 4，eIF4A)蛋白属于DEAD-box RNA解旋酶家族，具有RNA依赖的ATP酶活性和ATP依赖的RNA解旋酶活性。在蛋白质合成的起始阶段，在其他起始因子如eIF-3的帮助下，eIF4A促使核糖体40S小亚基识别mRNA并启动翻译过程。研究显示eIF4A是一种多功能蛋白，不仅参与蛋白质的翻译起始，而且在胚胎发育、无义介导的mRNA的降解、硒蛋白合成、脊椎动物发育等多种生命过程中都发挥着重要功能。研究表明果蝇的eIF4A可通过直接抑制卵巢中的分化因子BAM(Bag ofmarbles，BAM)的功能来控制生殖干细胞的自我更新。以弓形虫eIF4A基因构建的核酸疫苗pVAX-eIF4A能诱导小鼠产生强烈的体液免疫和Th1型免疫应答，延长受免疫小鼠的生存时间。

RNA干扰(RNAi)技术目前已经在功能基因组学、基因治疗、微生物学研究和药物研发等领域里取得了令人瞩目的进展。RNA干扰是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制，是双链RNA(dsRNA)介导的、序列特异的靶基因转录后基因沉默的过程。将与靶基因转录的产物mRNA存在同源互补序列的双链RNA导入细胞后，能特异性地降解该mRNA，从而产生相应的功能表型缺失。所谓的小分子干扰RNA(small interfering RNAs，siRNAs)，是能够以同源互补序列mRNA为靶目标并将其降解而介导RNA干扰途径的短片段双链RNA分子，通常由20多个核苷酸组成，能进行特异性的转录后基因沉默。siRNA已经广泛应用于基因表达调控机制研究等领域。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种日本血吸虫eIF4A基因的siRNA，该siRNA可明显抑制SjeIF4A基因的转录，可用于制备治疗血吸虫病的药物。

此外还提供了一种日本血吸虫eIF4A基因的siRNA在制备治疗血吸虫病的药物中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:

在本发明的一个方面，提供了一种特异性抑制日本血吸虫eIF4A基因表达的siRNA，其含有与日本血吸虫eIF4A基因的靶序列杂交的核苷酸序列，所述靶序列选自SEQID NO.1～ SEQ ID NO.3所示序列。

所述siRNA包含第一链和第二链，该第一链和第二链互补形成RNA二聚体，且该第一链的RNA序列与日本血吸虫eIF4A基因的靶序列相一致，所述siRNA的第一链和第二链选自下述的一对或任意两对以上的组合：

SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；