[发明专利]体液中有核细胞吸印富集与吸印染色一体化反应装置及方法

权利要求书

1.一种体液中有核细胞吸印富集与吸印染色一体化反应装置，其特征在于：包括微孔膜(1)，微孔膜(1)设有固定件(2)，固定件(2)上设有反应槽(6)；反应槽(6)上设有上盖(7)；固定件(2)的一侧设有可升降载物台(3)，固定件(2)下方设置有存储仓(5)；所述的存储仓(5)中充填有吸水物质。

2.根据权利要求1所述的体液中有核细胞吸印富集与吸印染色一体化反应装置，其特征在于，所述的微孔膜(1)包括聚碳酸酯膜、聚醚砜膜、硝酸纤维素薄膜。

3.根据权利要求1所述的体液中有核细胞吸印富集与吸印染色一体化反应装置，其特征在于：所述的微孔膜(1)与固定件(2)相连接；所述的固定件(2)为普通玻片式：将两片玻片制孔，将微孔膜(1)粘着或夹在孔中间，用环形垫支撑夹紧微孔膜；其中一玻片上粘结有待盛液体的反应槽(6)，用于加体液或反应液。

4.根据权利要求1所述的体液中有核细胞吸印富集与吸印染色一体化反应装置，其特征在于：所述的微孔膜(1)与固定件(2)相连接；所述的固定件(2)为3D打印玻片式：分有适当孔径的上下两片，上片直接在孔的上方打印盛液体的反应槽(6)，将微孔膜(1)粘在或夹在上下片的两孔之间，用环形垫支撑夹紧微孔膜。

5.根据权利要求1所述的体液中有核细胞吸印富集与吸印染色一体化反应装置，其特征在于：所述的固定件(2)通过插口(8)连接可升降载物台(3)。

6.根据权利要求1所述的体液中有核细胞吸印富集与吸印染色一体化反应装置，其特征在于：还包括底座(4)，所述的可升降载物台(3)与底座(4)连接；所述的存储仓(5)设置在底座(4)中。

7.根据权利要求1所述的体液中有核细胞吸印富集与吸印染色一体化反应装置，其特征在于：所述的微孔膜(1)、反应槽(6)、存储仓(5)上下同轴设置。

8.根据权利要求1所述的体液中有核细胞吸印富集与吸印染色一体化反应装置，其特征在于：所述的吸水物质包括吸水纸、吸水海绵、吸水树脂或吸水棉。

9.一种采用权利要求1-8之一所述的反应装置进行细胞富集的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)视实验细胞的大小选择固定好的微孔膜装置，安装放置在充填有吸水材料的存储仓上；

(2)在反应槽中加入适量的微孔膜活化液，待吸滤；

(3)在反应槽中加入适量的细胞悬浮液悬浮的体液，吸印富集截留有核细胞；

(4)在反应槽中加入适量的红细胞裂解液，裂解微孔膜上的少许红细胞；

(5)在反应槽中加入适量的细胞悬液，洗涤微孔膜；

(6)加入细胞固定液固定目标细胞，脱离存储仓；时间5-10分钟后，压盖于存储仓上吸滤液体。

10.一种采用权利要求1-8之一所述的反应装置进行吸印染色的方法，其特征在于，包括以下步骤

(1)视实验细胞的大小选择固定好的微孔膜装置，安装放置在充填有吸水材料的存储仓上；

(2)在反应槽中加入适量的微孔膜活化液，待吸滤；

(3)在反应槽中加入适量的细胞悬浮液悬浮的体液，吸印富集截留有核细胞；

(4)在反应槽中加入适量的红细胞裂解液，裂解微孔膜上的少许红细胞；

(5)在反应槽中加入适量的细胞悬液，洗涤微孔膜；

(6)加入细胞固定液固定目标细胞，脱离存储仓；时间5-10分钟后，压盖于存储仓上吸滤液体；

(7)脱离存储仓，加入0.1-0.2％的Triton X 100和1-10％的BSA或小牛血清，通透和封闭细胞及微孔膜；时间10-30分钟，压盖于存储仓上吸滤液体；

(8)脱离存储仓，加入细胞染色液或荧光标记抗体，染色30-60分钟，压盖于存储仓上吸滤液体。