[发明专利]一种人胎盘生长因子的检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种人胎盘生长因子的检测试剂盒。该试剂盒的主要包括特异性捕获抗体及特异性检测抗体；特异性捕获抗体及特异性检测抗体选自以下抗体：山羊多克隆抗体655170、小鼠单克隆抗体655565、山羊多克隆抗体446，且特异性捕获抗体与特异性检测抗体配对的种属来源应不同；本发明的试剂盒还包括固相载体、清洗液、增强液、标记物、校准品，以及实验缓冲液。本发明还提供了该检测试剂盒的使用方法。本发明检测试剂盒可用于检测人胎盘生长因子，具有操作简单、耗时短，准确性好、灵敏度高、线性范围宽、抗干扰性强、稳定性好等优点，在唐氏儿的辅助筛查以及不良妊娠反应的预测等方面具有良好的临床应用前景。

技术领域

本发明属于生物化学领域，涉及一种试剂盒，具体涉及一种时间分辨荧光免疫法检测人胎盘生长因子的试剂盒及其使用方法。

背景技术

胎盘生长因子(placental growth factor，PlGF)最早于1991年由Maglione等从人的胎盘cDNA文库中分离纯化而得。PlGF是一种分泌性同二聚体糖蛋白，其基因定位于14q24-q31。根据编码基因RNA不同的剪接方式，目前有4种异构体:即PlGF-1、PlGF-2、PlGF-3、PlGF-4，其碱基序列与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)基因有高度的同源性，属VEGF家族，与位于滋养层细胞及血管内皮细胞的fms样酪氨酸激酶受体-1(fms-like tyrosine kianse-1，Flt-1)结合后通过跨膜信号传导发挥病理生理学作用。PlGF主要由胎盘合体滋养层细胞合成，在心、肺、甲状腺、骨骼肌等脏器和血管源性的内皮细胞、血管平滑肌细胞、骨髓细胞等细胞也有所表达。PlGF在正常妊娠胎盘及母血中呈高表达，而男性及正常未孕女性几乎检测不到PlGF。PlGF能促进早孕时滋养细胞增殖与分化，由于其显著的血管生成特性，使得该因子与妊娠、炎症反应、心血管疾病、肿瘤等都有着密切的关系。PlGF丰富表达于胎盘，与血管新生、内皮细胞和滋养细胞功能相关，对胎盘形成和胎儿发育有着重要作用，其表达异常与不良妊娠结局以及妊娠相关并发症密切相关。妊娠期间PlGF水平变化为峰形，7～15孕周时，含量较低(平均约40～50pg/mL)，28～30孕周时达到高峰(约180pg/mL)，39～41孕周时降为55～65pg/mL，这与胎盘供氧变化及PLGF生理功能有关。研究表明PlGF与异位妊娠、先兆流产、胎儿宫内生长受限、先兆子痫、唐氏综合征等多种不良妊娠结局相关：

子痫前期(pre-eclampsia，PE)为妊娠期特有疾病，是围产期导致孕产妇及围产儿患病及死亡的重要原因，临床以妊娠20周以后新出现的高血压(收缩压＞140mmHg，或舒张压＞90mmHg)、蛋白尿(＞0.3g/24小时内)为主要特征。PE的发病率为2％～8％，10％～15％的孕产妇死因为PE及子痫。据统计，我国子痫前期的发病率约为9.5％。因此，子痫前期的预测及一级预防显得极其重要。PE病因复杂，其病因和发病机理尚未完全阐明，目前，已有大量研究证明sFlt-1和PlGF浓度的改变明显早于子痫前期发病。2004年有临床研究表明，sFlt-1浓度在子痫前期发病前约5周便出现升高，PlGF浓度在子痫前期发病前约9～11周便开始下降，在发病5周前开始急剧下降，发病前1周浓度已极为接近发病时浓度；早发型、晚发型以及非早产型子痫前期高风险孕妇的sFlt-1、PlGF浓度以及sFlt-1/PlGF在出现症状前均发生动态变化。