[发明专利]一种高纯度毛兰菲的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种高纯度毛兰菲的制备方法，该方法包括将新鲜流苏石斛切段、匀浆、萃取、浓缩、层析分离、去除色素和梯度洗脱的步骤，通过该方法可得到纯度为95％以上的毛兰菲。该发明还公开了高纯度毛兰菲在流苏石斛鉴别中的应用，包括对照品溶液、供试品溶液的制备步骤和薄层色谱法鉴别的步骤。该发明本发明通过薄层色谱法以定性、定量的方式鉴别流速石斛，防止性状判别法出现错误鉴别的问题，为流苏石斛的鉴别提供了更加科学、规范的鉴别方式，进而为行业或部门制定流苏石斛的鉴别标准提供思路；同时该发明可制备得到的毛兰菲纯度可达95％以上，为毛兰菲的试验研究提供支撑，进而为毛兰菲产业化生产打下基础。

背景技术

石斛又名仙斛兰韵、不死草、还魂草、紫萦仙株、吊兰、林兰、禁生、金钗花等；茎直立，肉质状肥厚，稍扁的圆柱形，长10～60厘米，粗达1.3厘米。药用植物，性味甘淡微咸，寒，归胃、肾，肺经。益胃生津，滋阴清热；用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明。石斛花姿优雅，玲珑可爱，花色鲜艳，气味芳香，被喻为“四大观赏洋花”之一。

石斛根据不同的产地以及性状可细分出七、八十不同的品种，且不同的石斛又具有不同的功能价值和药用价值，如铁皮石斛是石斛中的极品，具有独特的养阴生津效果，受到历代医家和医学典籍的推崇。2010年10月1日起实施的2010年版《中华人民共和国药典》新增了铁皮石斛单列标准，改写了铁皮石斛没有国家标准的历史。在新版药典中，增加了铁皮石斛薄层色谱鉴别、甘露糖与葡萄糖峰面积比及杂质、水分、总灰分、浸出物等检查项目，并制定了多糖与甘露糖含量测定方法，制定出具有专属性的鉴别与质量可控的含量测定方法。

由于铁皮石斛具有极高的药用价值，大多数的研究者把主要精力集中于铁皮石斛的研究中个，而流苏石斛因其药用价值低于铁皮石斛而受到较少的关注。有研究发现流苏石斛中的毛兰素、毛兰菲和鼓槌菲均有不同程度抗肿瘤活性，其中毛兰菲对于小鼠肝癌的抑制率最高，从而引发科研机构对于流苏石斛的极大兴趣。然而，目前针对流苏石斛的鉴别多集中于石斛的性状鉴别的阶段，极易发生误判的问题；同时，现有提取毛兰菲的方法得到的毛兰菲的纯度低、收率低，无法规模化生产进而得到商业应用。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种高纯度毛兰菲的制备方法，包括以下步骤：

Step1.将新鲜流苏石斛，切成0.5-1cm的小段，按照1：1～1：5的比例加入纯净水，用匀浆机进行匀浆，得液体；

Step2.所得液体按体积比1:1～1：5的石油醚进行萃取，重复萃取2～3次，然后将萃取得到的石油醚层合并，浓缩至干，得浸膏；

Step3.所得浸膏经硅胶柱层析进行分离，10：1石油醚/乙酸乙酯300～400mL去除色素，3:2石油醚/乙酸乙酯,300～500mL等度洗脱，浓缩，重结晶，得95％以上纯度的毛兰菲。

一种高纯度毛兰菲在流苏石斛鉴别中的应用，包括以下步骤：

Step1.高纯度毛兰菲加入甲醇制成每1ml含有0.1mg的溶液，作为对照品溶液；

Step2.取待鉴别植株10g，切成0.5-1cm的小段，按照1：2的比例加入水，用匀浆机进行匀浆，加石油醚100ml，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，得到溶液作为供试品溶液；

Step3.薄层色谱法鉴别：用毛细管取供试品溶液、对照品溶液，并分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以3:2石油醚/乙酸乙酯为展开剂进行展开、取出、晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，显粉红色，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，则待鉴别植株为流速石斛。