[发明专利]一种人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法

说明书

本发明涉及细胞工程技术领域，具体涉及一种人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，包含人体脂肪干细胞的提取步骤和人体脂肪干细胞的培养扩增步骤；人体脂肪干细胞的提取通过人脂肪消化液实现，所述的人脂肪消化液包含：胆酸、甘氨酸、α1‑抗胰蛋白酶、二甲基亚砜、0.9%生理盐水、氯化镁、氯化胆碱、Trypsin‑EDTA；人体脂肪干细胞的培养扩增通过脂肪干细胞培养基实现，所述的脂肪干细胞培养基包含：DMEM/F12基础培养基、甲状腺素、胰岛素、谷氨酰胺、葡萄酸铁、硒酸钠、维生素C、成纤维细胞生长因子、L‑脯氨酸、氯化胆碱、青霉素；本发明所述人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，可显著提高所获得的干细胞的数量、成活率和活性。

技术领域

本发明涉及细胞工程技术领域，具体涉及一种人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法。

背景技术

干细胞是一种具有自我更新能力和多向分化潜能的原始细胞，在特定条件下，还可以增殖并定向分化成不同的功能细胞。因此干细胞的研究对生命体各个组织器官的更新和损伤修复有重要意义，逐渐成为许多无法治愈的疾病，特别是细胞及组织缺失或损伤性疾病的唯一希望。而脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)、ADSC多能细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。主要恢复组织细胞的修复功能，促进细胞的再生，恢复年轻面容的同时，身体机能也得到充分改善，有效改善亚健康、早衰等疾病，由内而外真正的有效抵抗衰老。

目前常用的脂肪干细胞的分离培养方法是从脂肪组织分离获取细胞，经机械和酶处理方法除去红细胞等成熟细胞后，利用饲养层细胞与采用含10％胎牛血清的培养基进行培养。这种培养干细胞方法的缺点是方法复杂，提取的干细胞数量少，纯度不高，继代增殖缓慢。现有常规培养技术采用外源血清(如胎牛血清)促进脂肪干细胞增殖，此种技术虽然能达到增殖目的，但是原代培养费时较长，且外源血清其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。

因此，需要寻求一种可有效提取和培养扩增人体脂肪干细胞的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，所述人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法可显著提高所获得的干细胞的数量、成活率。

本发明所要解决的上述技术问题，通过如下技术方案予以实现：

一种人体脂肪干细胞的提取及培养扩增方法，包含如下步骤：人体脂肪干细胞的提取步骤和人体脂肪干细胞的培养扩增步骤。

作为一种优选方案，人体脂肪干细胞的提取通过一种人脂肪消化液实现，所述的人脂肪消化液包含：0.3～0.8mg/ml胆酸、0.5～1.5mg/ml甘氨酸、0.5～2.5mg/mlα1-抗胰蛋白酶、3～25μl/ml二甲基亚砜、175～220mg/mL 0.9％生理盐水、60～85mg/ml氯化镁、10～30mg/mL氯化胆碱、2.5～7.5mg/ml Trypsin-EDTA。

作为一种优选方案，人体脂肪干细胞的提取通过一种人脂肪消化液实现，所述的人脂肪消化液包含：0.5～0.7mg/ml胆酸、0.8～1.2mg/ml甘氨酸、1～2mg/mlα1-抗胰蛋白酶、10～18μl/ml二甲基亚砜、200～210mg/mL 0.9％生理盐水、70～80mg/ml氯化镁、15～25mg/mL氯化胆碱、4～6mg/ml Trypsin-EDTA。

作为一种优选方案，人体脂肪干细胞的提取通过一种人脂肪消化液实现，所述的人脂肪消化液包含：0.6mg/ml胆酸、1mg/ml甘氨酸、1.5mg/mlα1-抗胰蛋白酶、15μl/ml二甲基亚砜、205mg/mL 0.9％生理盐水、75mg/ml氯化镁、20mg/mL氯化胆碱、5mg/ml Trypsin-EDTA。