[发明专利]多肽Ahf-caltide的新用途

说明书

本发明属于生物医学领域，涉及一种多肽Ahf‑caltide的新用途。本发明所提供的多肽Ahf‑caltide具有穿透多种细胞膜的功能，可携带蛋白质等大分子跨膜进入细胞内，因此多肽Ahf‑caltide是一种极具开发前景的可用于蛋白、多肽等生物活性分子的跨膜运输载体，可用作细胞内药物运输载体。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种多肽Ahf-caltide的用途，即多肽Ahf-caltide能够穿透多种哺乳动物细胞的细胞膜的用途。

背景技术

生物膜作为天然的渗透屏障，对于活细胞的生存和功能是必不可少的。然而，这些天然屏障可能成为药物在细胞内能有效发挥作用的主要障碍。因此，有效跨越细胞膜的化合物是提高非透性药物治疗价值和靶向特异性的关键。近二十年来，通过引入多肽(Cell-penetrating peptides, CPPs)或者蛋白质转导域(protein transduction domains,PTDs)，将多肽作为细胞内“货物”传递的新载体受到越来越多的关注，提高了细胞内传递的效率。CPPs是一种具有多种结构和理化性质的多肽，他们有一些共同的特点：（1）它们都是含有5-30个氨基酸的短肽；（2）它们还具有跨越细胞膜的能力，这种能力不受DNA、RNA、反义核苷酸、质粒、脂质体、蛋白质、纳米颗粒等分子共价非共价结合的限制。CPPs通常指一类小的阳离子肽，它们可以穿过许多哺乳动物细胞的质膜，具有跨细胞膜转运的能力，这些多肽在药物传递过程中的重要性在于它们能够将具有生物活性的大分子如蛋白质或寡核苷酸均匀转运到在标准培养条件下生长的哺乳动物的细胞群中，且对宿主细胞没有明显的毒副作用，可以作为核酸、蛋白质、siRNA、治疗剂、纳米颗粒等多种“货物”的合适载体。

根据CPPs的来源，可以分为三大类：(1)生物产生的天然肽；(2)嵌合肽，它们是修饰的天然蛋白质；(3)实验室完全设计和合成的合成肽，基于他们的物理化学性质，CPPs还可以分为如下三组：(1)长度为6-12个氨基酸的阳离子肽，主要由精氨酸、赖氨酸和/或鸟氨酸残基组成；(2)疏水性肽，如分泌生长因子或细胞因子的前导序列；(3)将疏水肽与核定位信号连接得到的两亲性肽。迄今为止，CPPs的数量众多，已被广泛应用于多种领域，如将化疗药物或生物制剂用于靶向肿瘤、改善病毒感染、增强非病毒介导的基因传递、向细胞系传递小干扰RNA、体内成像法等。由于CPPs具有较低的细胞毒性和免疫原性，已应用于体外或体内实验并取得了良好的效果。CPPs已经成为提高细胞内传递效率的潜在工具，但它可能引起由于膜通透性的变化而导致的细胞质纰漏以及由与两亲性CPPs相互作用而导致的膜蛋白功能障碍的异常，与传统的人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）-I的转录活化因子（Transcriptional activator, Tat）穿膜肽 HIV Tat 49-57 序列RKKRRQRRR相比，我们的穿膜肽来自于哺乳动物细胞内源性蛋白质的一部分序列，未诱导任何毒性且能进入多种细胞如肿瘤细胞、大鼠心肌细胞等，在多种疾病治疗中有更为潜在的应用。

本发明涉及的多肽Ahf-caltide是由3Glu、1Gly、3Lys、2Pro、1His、1Thr这11个氨基酸组成的，其序列为EGKPKEHTEPK，分子量为1279.43，其中碱性氨基酸为4个，占整个多肽的36.36%。本人通过研究证实了，多肽Ahf-caltide对多种哺乳动物细胞的细胞膜的穿透作用。目前，关于多肽Ahf-caltide能够穿透多种哺乳动物细胞的细胞膜的用途并未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种多肽Ahf-caltide，其具有细胞膜穿透能力。

本发明所述多肽由3Glu、1Gly、3Lys、2Pro、1His、1Thr组成的，序列为EGKPKEHTEPK(SEQ ID1)，分子量为1279.43。

一种多肽Ahf-caltide具有穿透细胞膜的功能，能够携带蛋白等跨膜进入体外多种细胞内，是一种极具开发前景的蛋白、核酸等生物活性分子的跨膜运输载体。