[发明专利]杂色曲霉菌株在发酵生产曲酸中应用

权利要求书

1.一种杂色曲霉菌（Aspergillus versicolor）菌株在发酵生产曲酸中应用，其特征在于，所述杂色曲霉菌菌株的保藏号为 ATCC 28286；其中利用该杂色曲霉菌菌株发酵生产曲酸包括如下步骤：

（1）将所述杂色曲霉菌株进行活化、扩大培养后再接种于发酵培养基中，25-32℃避光培养30-50天；发酵培养基为大米固体培养基，获得大米发酵物；

（2）将步骤（1）中的所述大米发酵物利用乙酸乙酯提取2-3次，每次冷浸提取15-21 h，合并提取液，降压浓缩得到乙酸乙酯浸膏；

（3）将步骤（2）中的所述的乙酸乙酯浸膏进行正相柱色谱洗脱；其中所述正相柱色谱洗脱中以200-300目硅胶做柱层析硅胶，用石油醚与乙酸乙酯的体积比分别为10:1、5:1、1:1、1:3、0:1进行梯度洗脱，结合薄层硅胶色谱检测根据组分极性不同分为Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5，HPLC检测曲酸集中在Fr.5，相对含量为45％；将组分Fr.5上HP-20大孔吸附树脂柱，湿法装柱，将该组分用20mL无水甲醇溶解后湿法上样，吸附过夜；然后依次以0％、5％、10％、30％、70％、100％甲醇一水梯度洗脱，洗脱速度为1-3Bv/h，每个梯度洗脱6Bv，分别收集每个梯度的洗脱液合并，减压浓缩至完全干燥，得到对应的亚组分；含有曲酸的亚组分集中在5％甲醇一水梯度洗脱段，曲酸的相对含量为78％；其中高效液相色谱法检测的色谱条件：流动相：5％MeOH，流速1mL/min，20min，检测波长210nm，曲酸保留时间5.16min，将含有所述曲酸的所述亚组分减压浓缩干燥后得到棕红色块状晶体样的粗制曲酸；

（4）将步骤（3）中的所述粗制曲酸利用40%乙醇-水加热至80℃溶解后过滤，冷却析晶得到呈无色块状晶体的曲酸，分子式为C₆H₆O₄；化学结构式如下

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2.根据权利要求1所述的杂色曲霉菌（Aspergillus versicolor）菌株在发酵生产曲酸中应用，其中，步骤（1）中所述大米固体培养基中大米与水的加入量为0.5 g/ml -0.7g/ml。

3.根据权利要求1所述的杂色曲霉菌（Aspergillus versicolor）菌株在发酵生产曲酸中应用，其中，步骤（1）中所述活化的方法为：将所述杂色曲霉菌株在马铃薯固体培养基上活化4-5天，再挑取菌丝和孢子在马铃薯液体培养基上，25-32℃、100-140rpm摇床震荡培养5天作为种子液。