[发明专利]一种富集高活性脂肪颗粒细胞和脂肪干细胞的脂肪移植物及其制备方法和应用

说明书

本发明属于脂肪移植技术领域，具体涉及一种富集高活性脂肪颗粒细胞和脂肪干细胞的脂肪移植物及其制备方法和应用。该方法包括如下步骤：采用注射器手动负压抽脂后，将得到的脂肪离心获得脂肪层，再将脂肪层下层消化制得细胞悬液，上层推注得到用于移植的中间层，最后将细胞悬液与中间层混匀，即得到富集高活性脂肪颗粒细胞和脂肪干细胞的脂肪移植物。本发明的优点在于，该方法最终制得的脂肪移植物，与传统SVF‑gel相比得率更高，含有大量高活性的颗粒脂肪细胞、SVF‑cells及脂肪干细胞，这些细胞浓度是正常脂肪组织的5～10倍，移植脂肪存活率可以达到70％，移植脂肪质地更柔软均匀，出现油性纤维包块、纤维结节等不良反应的几率显著降低。

技术领域

本发明属于脂肪移植技术领域，涉及一种脂肪组织的处理方法，尤其涉及一种富集高活性脂肪颗粒细胞和脂肪干细胞的脂肪移植物及其制备方法和应用。

背景技术

自体脂肪组织因其具有生物相容性、稳定性、术后效果自然、材料容易获得、来源丰富、对供区损伤较小和可重复手术等特点，被人们看作是理想的软组织填充材料。临床上整形医师对于自体脂肪移植的使用呈不断的上升趋势。

移植脂肪组织的存活与脂肪组织内血管神经的再建联系紧密，已经证实脂肪组织来源的脂肪干细胞具有刺激血管生成的作用，可在脂肪组织移植后缺血缺氧的条件下释放血管生成因子，促进血管的再建。在传统的脂肪移植中，脂肪抽吸物中的脂肪部分经分离后直接用于注射填充，抽吸的脂肪组织中，颗粒脂肪细胞被破坏严重，细胞外基质成分以及其中的祖细胞所占成熟细胞的比例明显降低，这些细胞外基质中的祖细胞对于脂肪组织的存活十分重要，祖细胞的缺乏可能是导致移植脂肪组织吸收萎缩的一个重要原因。细胞辅助的吸脂-脂肪移植疗法(Cell Assisted Liposuction，CAL)，是将新鲜分离的脂肪细胞外血管基质碎片细胞(SVF-cells)加入到脂肪抽吸物中，联合脂肪移植。研究证实，相对于传统的脂肪移植法，此种方法的脂肪存活率可提高20％～30％。但此种方法依旧面临着颗粒脂肪细胞被破坏严重、添加的SVF-cells活性不能保证，以及移植后由于游离油脂的存在会导致出现油性纤维包块、纤维结节等问题。

目前，应用物理方式破坏抽取的脂肪组织中的成熟脂肪细胞，通过离心去除油脂后保留脂肪细胞外的基质成分，制成可以局部注射填充的一种自体脂肪组织填充物(SVF-gel)，可以达到透明质酸、胶原蛋白等物质的填充效果。此种方式在破坏成熟脂肪细胞的同时，也破坏掉其余活细胞，最终得到类似于自体胶原的填充物。此种方式填充后SVF-gel吸收率低，并且凝胶产率只有10％～15％，一般只适用于小剂量的填充，对于治疗有大体积脂肪移植或自身脂肪储存量不够的患者存在很大局限。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种富集高活性脂肪颗粒细胞和脂肪干细胞的脂肪移植物及其制备方法和应用。

本发明所采用的技术方案为：

本发明的主要目的是提供一种能够快速制取富集高活性脂肪颗粒细胞和脂肪干细胞的脂肪移植物的方法。通过适宜强度的机械处理，在去除脂肪和抽取部分脂肪细胞破坏所释放的油脂时，浓缩移植脂肪组织中的脂肪干细胞浓度，并且尽可能的维持细胞活性。此外，通过合适的移植脂肪分配，适宜的细胞添加浓度，促进脂肪移植存活，降低脂肪移植后油性纤维包块、纤维结节出现的几率。

本发明提供了一种富集高活性脂肪颗粒细胞和脂肪干细胞的脂肪移植物的制备方法，包括如下步骤：

(1)用注射器手动负压抽脂，去水，得到颗粒脂肪；

(2)向颗粒脂肪中加入生理盐水，混匀，离心，收集上层脂肪，得到脂肪层；

(3)将步骤(2)中得到的脂肪层分为上层脂肪层和下层脂肪层；

取所述下层脂肪层，消化，离心，去除红细胞后用人血白蛋白溶液重悬，得到细胞悬液；