[发明专利]重楼块根的石蜡切片方法

权利要求书

1.一种重楼块根的石蜡切片方法，其中，包括：

将重楼块根样品依次经过固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片、脱蜡、染色和封片后得到所述重楼块根的石蜡切片；

其中，所述固定的方法为：将重楼块根样品置于固定液、负压以及红外照射的环境中24小时及以上。

2.如权利要求1所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述固定液为FAA固定液，所述FAA固定液中混合有丙三醇；

所述负压为-0.01～-0.09Mpa：所述重楼块根样品的长宽高均为5厘米；

所述红外照射为波长600～1000nm的红外光照射。

3.如权利要求2所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述负压呈以下周期变化：

-0.01Mpa下保持5分钟；-0.03Mpa下保持15分钟；-0.05Mpa下保持20分钟；-0.07Mpa下保持15分钟；-0.09Mpa下保持5分钟，以此形成一个周期并循环直至固定结束。

4.如权利要求1所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述脱水的步骤为：将重楼块根样品在冻存管中按照50％、70％、85％、95％乙醇浓度逐级各脱水一次，每次1.5～2h，再放入95％乙醇脱水1h，最后100％乙醇脱水两次，每次各30～45min。

5.如权利要求4所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述透明的步骤为：先采用1/2无水乙醇+1/2环保透明剂对重楼块根样品透明处理两次；

再用环保透明剂对重楼块根样品透明处理两次；

每次透明处理的时间为1～2小时。

6.如权利要求5所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述浸蜡的步骤为：

将重楼块根样品放入安瓿瓶中，加入环保透明剂浸过重楼块根样品，按环保透明剂:碎石蜡的质量比＝1:0.3加入碎石蜡，待碎石蜡完全溶解后，再按同样的质量比加入2～3次碎石蜡，然后将安瓿瓶放入37℃烘箱中6～12小时；

然后将烘箱温度升高至42℃，分3-4次加入碎石蜡，直到饱和；

再将烘箱温度升高到60℃，再按同样的质量比加入3-4次碎石蜡后保持6～12小时；

然后将重楼块根样品转移到纯的液态石蜡中，保持4小时后，可进行后续的包埋；

其中，所述碎石蜡的制备方法为：将新蜡和使用过三次以上的老蜡按照1:1的质量比混合，然后置于85℃的烘箱中充分溶解，采用300目的尼龙网过滤后冷却成型，再割碎得到所述碎石蜡。

7.如权利要求6所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述包埋的步骤为：

将所述碎石蜡在85℃的烘箱中充分溶解得到液态蜡，将重楼块根样品放入到所述液态蜡中，待液态蜡表面冷凝后，立即放在预先准备的冰冷水中，促进蜡快速凝固成型。

8.如权利要求7所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，使用切片机切片得到厚度为10～14微米的薄片；

再对所述薄片进行脱蜡，所述脱蜡的步骤为：环保透明剂10min；1/2环保透明剂和1/2纯无水乙醇3min；100％、95％、85％、70％、50％酒精和蒸馏水各5～10分钟。

9.如权利要求8所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，所述染色的步骤为：

将脱蜡后的薄片放于0.5％-1％番红水溶液中染色15～20h，蒸馏水洗去多余染液，分别经过30％、50％、70％、80％、95％酒精脱水，每级5分钟，再用含0.1％固绿的95％酒精复染10～40秒。

10.如权利要求3所述的重楼块根的石蜡切片方法，其中，使用专用固定装置进行所述固定步骤，所述专用固定装置包括：

外体，其内部具有容纳空间，所述外体的上端封闭并在中心位置预留有插入口；

内胆，其从所述插入口竖直到所述外体内，所述内胆与外体之间形成隔离空间，所述内胆内具有用于容纳固定液的空间，所述内胆上端开口；

盖体，其包括盖板和竖部，所述竖部垂直连接至所述盖板，所述盖体盖合至所述外体上端时，所述竖部伸入到所述内胆内，所述盖板将所述内胆的上端开口封闭，其中所述竖部的下端设置有用于放置重楼块根样品的篮子，所述篮子的侧壁设置有网孔使得篮子内外连通；

抽气泵，其通过气管连通至所述内胆的上部侧壁，所述气管在所述隔离空间内呈U型设置，所述气管的U型底部形成液体沉积部，所述液体沉积部设置有排液管伸延至外体外部，所述排液管上设置有阀体；

红外灯，其设置在所述隔离空间内并朝向所述内胆；

控制模块，其包括用于测量内胆内部气压的气压传感器、用于感应内胆内部温度的温度传感器、控制器；所述控制器与气压传感器、温度传感器、抽气泵以及红外灯连接，所述控制器根据气压传感器的气压控制所述抽气泵，根据所述温度传感器的温度信号控制所述红外灯。