[发明专利]联合定量检测五项心脏标志物试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种联合定量检测超敏C反应蛋白、髓过氧化酶、脂蛋白磷脂酶A2、氧化低密度脂蛋白、F2-异前列腺素荧光免疫层析检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括检测卡、干燥剂和密封袋，所述检测卡包括扣卡和试剂条；所述试剂条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和PVC底板，所述结合垫分别包被有超敏C反应蛋白、髓过氧化酶抗体、脂蛋白磷脂酶A2抗体、氧化低密度脂蛋白、F2-异前列腺素抗体；所述硝酸纤维素膜包被固定有与所述检测抗体具有对人敏C反应蛋白、髓过氧化酶、脂蛋白磷脂酶A2、氧化低密度脂蛋白、F2-异前列腺素配对结合特性的抗人敏C反应蛋白、髓过氧化酶、脂蛋白磷脂酶A2、氧化低密度脂蛋白、F2-异前列腺素捕获抗体。

2.根据权利要求1所述联合检测试剂盒，其特征在于，所述荧光物质包括荧光素和荧光微球的至少一种，所述的荧光微球的粒径范围为50nm-500nm。

3.根据权利要求1所述的联合检测试剂盒，其特征在于，所述的荧光物质选自荧光素cy5、荧光素cy7、含铕聚苯乙烯微球、2-甲氧基荧光增强素、罗丹明、藻红蛋白中的一种。

4.根据权利要求1所述的联合检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括样品垫和滤血膜至少一种。

5.根据权利要求1所述的联合检测试剂盒，其特征在于，所述超敏C反应蛋白抗体为抗超敏C反应蛋白单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体的一种或多种配对组合、髓过氧化酶抗体为抗髓过氧化酶单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体的一种或多种配对组合、脂蛋白磷脂酶A2抗体为抗脂蛋白磷脂酶A2单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体的一种或多种配对组合、氧化低密度脂蛋白抗体为抗氧化低密度脂蛋白单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体的一种或多种配对组合、F2-异前列腺素抗体为抗F2-异前列腺素单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体的一种或多种配对组合。

6.一种如权利要求1所述的联合检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

(1)样品垫的处理：将玻璃纤维素膜用含有2％BSA、0.1MNaCl和表面活性剂，pH7-8的缓冲液浸泡，于4℃浸泡4小时，然后置于烘箱中，37℃干燥8小时即可。如上制备5份；

(2)结合垫的制备：在步骤(1)制得的5份样品垫上分别均匀的铺上荧光微球标记的hs-CRP抗体、MPO抗体、Lp-PLA2抗体、ox-LDL抗体或F2-isop抗体溶液，真空冷冻干燥后密封，室温保存备用；

(3)滤血膜的制备：将滤血膜裁剪成10cm×4mm每条；

(4)包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜的制备：

a.检测线制备：将羊抗人标记抗体用稀释包被液稀释至1.0mg/mL的浓度，0.8ul/cm的划线速率在硝酸纤维素膜上用以上稀释抗体液划线得到检测线；

b.质控线制备：将羊抗鼠IgG抗体用50mM/L pH7.2的PB缓冲液稀释到1.0mg/mL的浓度，0.8ul/cm的划线速率在硝酸纤维素膜上用以上稀释液划线得到质控线；

c.检测线和质控线间隔为5mm，划线完毕后将硝酸纤维素膜置于37℃干燥8小时即得；

(5)吸水纸的制备：将吸水纸裁剪成30cm×2.7cm每条；

(6)组装：将上述处理好的样品垫、微球标记结合垫、滤血膜、硝酸纤维素膜和吸水纸依次粘贴于PVC底板上，贴好后裁剪成4mm宽的试纸条，并置于五联体扣卡内，加入干燥剂封装即得。

7.根据权利要求6所述联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述的样品垫的制备的缓冲液选自Tris、PBS或甘氨酸中的一种，所述表面活性剂选自Tween20或TritonX-100中的一种。

8.根据权利要求6所述的联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述的荧光微球的粒径范围为50nm-500nm。