[发明专利]一种经代谢调控激活杜仲内生真菌沉默基因的方法

说明书

本发明公开了一种经代谢调控激活杜仲内生真菌沉默基因的方法。所述杜仲内生真菌的命名为：Aspergillus sp.GZWMJZ‑055，于2018年11月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国武汉，保藏号为CCTCC NO：M 2018808。该方法是将采用上述菌株制备种子液，然后在添加杜仲叶的真菌液体培养基或者添加杜仲叶的固体培养基中进行发酵。通过该方法，所述菌株添加杜仲叶调控后沉默基因显著激活，代谢产物的丰富程度以及发酵效价显著提高，发酵提取物抑制α‑葡萄糖苷酶的活性明显提高。

技术领域

本发明涉及一株内生真菌，具体的是一种经代谢调控激活杜仲内生真菌沉默基因的方法。

背景技术

植物内生真菌与其宿主植物在长期协同进化过程中，形成了互惠共生关系，内生真菌的代谢途径受宿主植物的影响，其合成次生代谢产物的编码基因非常丰富。但是大部分编码基因在常规培养条件下处于沉默状态。因此，通过代谢调控使内生真菌代谢产物多样性和新颖性充分表达出来，是有效利用植物内生真菌资源的迫切需要。

发明内容

本发明目的在于针对现有技术存在的不足之处，提供一种可有效激活内生真菌沉默基因表达的方法，并获得沉默基因显著激活的杜仲内生真菌，菌株GZWMJZ-055，鉴定为曲霉菌（Aspergillus sp.），保藏号为CCTCC NO：M 2018808，保藏日期为2018年11月21日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址为中国武汉。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，一种经代谢调控激活杜仲内生真菌沉默基因的方法，该方法的具体步骤为：

A.种子液制备，将上述的菌株按培养基的重量份数的1-3%接种在培养基中扩大培养制备种子液；

B.在真菌液体培养基或者固体培养基中添加杜仲叶，将种子液接种到配置好的真菌液体培养基或者固体培养基中进行发酵。

其中步骤A中所述的种子液培养基的重量份数为：甘露醇15-25份、麦芽糖15-25份、葡萄糖5-10份、谷氨酸钠5-10份、酵母浸膏1-3份、玉米粉0.5-1份、磷酸二氢钾0.5-1份、硫酸镁0.3-1份，加入到800-1000份纯净水中，调节pH值 6.5~7.5。

步骤B中所述真菌液体培养基的组成按重量份数计为：可溶性淀粉10-15份、蛋白胨1-2份、纯净水1000份、调节pH值 6.5~7.5；所述的真菌固体培养基的组成按重量份数计为：大米100-150份、纯净水100-150份。

步骤B中种子液接种到配置好的真菌液体培养基或者固体培养基中进行发酵温度为28-35℃，发酵时间为20—30天。

步骤B中真菌液体培养基或者固体培养基添加杜仲叶的量为：杜仲干叶按培养基的重量的1%-2%添加，新鲜杜仲叶按培养基的重量的5%-10%添加，或添加后杜仲叶与培养基一起灭菌后备用。

发酵结束后，真菌液体培养基和固体培养基均用少量的乙酸抑制将菌株灭活，然后用等体积的乙酸乙酯萃取三遍，浓缩得到发酵提取物。在菌株发酵培养基中添加杜仲叶进行调控后，菌株的发酵效价明显提高。

具体实施方式

实施例1

一种经代谢调控激活杜仲内生真菌沉默基因的方法，该方法的具体步骤为：

选择菌株的名称为：Aspergillus sp. GZWMJZ-055，于2018年11月21日保藏单位于中国典型培养物保藏中心，地址中国武汉，保藏号为CCTCC NO：M 2018808。

A.种子液制备，将上述的菌株按培养基的重量份数的1%接种在培养基中扩大培养制备种子液；