[发明专利]一种克百威农药的纳米抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种克百威农药的纳米抗体及其制备方法和应用，该纳米抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码其的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明得到一种针对克百威农药的纳米抗体，该纳米抗体能够检测克百威农药，且检测结果准确、效果好、稳定性好，在高温和有机溶剂的条件下还有很好的检测效果。该抗体不仅可以广泛的应用于农产品中克百威农药残留的检测；还可以作为前体，通过随机或定点突变技术进行改造，能够获得性质(亲和性、特异性、稳定性等)更好的突变体，用来发展进一步用于食品、医药、农业等领域，有很大的应用推广价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地，涉及一种克百威农药的纳米抗体及其制备方法和应用。

背景技术

氨基甲酸酯类化合物在农药上用作杀虫剂、杀螨剂、除草剂和杀菌剂，已形成农药的一大类别，品种多、药效好、低毒。氨基甲酸酯类农药是农药急性中毒的主要原因，也是时下蔬菜中农药残留的重点检测品种。

克百威商品名呋喃丹，是氨基甲酸酯类广谱内吸杀虫杀螨杀线虫剂，可用于多种作物防治土壤内及地面上的300多种害虫和线虫。并有缩短作物生长期、促进作物生长发育从而有效提高作物产量的作用。广泛应用于蔬菜、水果和粮食作物等的害虫防治中。但是，克百威对人和动物有很高的毒性，并且不易降解，容易造成环境污染。我国已规定食品中克百威的最大残留限量，但违规使用现象仍然较多，因此加强对克百威农药残留的检测十分必要。

目前，克百威残留分析一般使用气相色谱法(简称GC)、高效液相色谱法(简称HPLC)及色谱质谱联用技术，这些方法灵敏、准确，可以同时测定多种药物，但样品前处理复杂、繁琐费时，且需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员，检测成本高，难以满足样品现场、批量、快速检测的需要。因此，开发一种简单快速、适用于农药残留现场监控的分析方法具有重要意义。而基于抗体建立的免疫分析方法，虽然具有快速、灵敏、高通量的优势，但是在极端条件下抗体往往稳定性差，容易失活。

因此目前缺乏一种稳定性好的克百威抗体。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种克百威农药的纳米抗体及其制备方法和应用。

本发明的第一个目的是提供一种特异性识别克百威的纳米抗体。

本发明的第二个目的是提供一种编码特异性识别克百威纳米抗体的基因。

本发明的第三个目的是提供一种重组载体。

本发明的第四个目的是提供一种重组细胞。

本发明的第五个目的是提供所述纳米抗体、所述基因、所述重组载体、或所述重组细胞中的一种或几种在检测克百威或制备克百威的检测试剂盒中的应用。

本发明的第六个目的是提供所述纳米抗体的制备方法。

本发明的第七个目的是提供一种克百威的检测方法。

本发明的第八个目的是提供一种检测克百威的试剂盒。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

纳米抗体的稳定性好、亲和力较高，克服了小分子功能抗体的缺点，同时又具有分子质量小、免疫原性弱、组织穿透力强等单克隆抗体、多克隆抗体不具备的优点。本发明通过噬菌体展示技术，从驼源免疫单域重链抗体库中筛选出能与靶分子(克百威完全抗原)特异性结合的纳米抗体，建立了一种快速、灵敏且稳定的检测蔬菜、茶叶中克百威残留的方法。

因此本发明要求保护以下内容：

一种特异性识别克百威的纳米抗体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

编码特异性识别克百威纳米抗体的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。