[发明专利]凝结芽孢杆菌在制备诱导抗肿瘤免疫及免疫检查点抑制剂增敏制剂中的应用

说明书

本发明公开了凝结芽孢杆菌在制备诱导抗肿瘤免疫及免疫检查点抑制剂增敏制剂中的应用，具体是用凝结芽孢杆菌为主要活性成分，制成药品等生物制剂，并联合免疫检查点抑制剂治疗癌症。该制剂能够有效诱导抗肿瘤免疫，增加免疫检查点抑制剂应答率和治疗效果，降低副作用，延长生存期。

技术领域

本发明涉及凝结芽孢杆菌在制备诱导抗肿瘤免疫及免疫检查点抑制剂增敏制剂中的应用，具体是用凝结芽孢杆菌制备诱导抗肿瘤免疫及免疫检查点抑制剂增敏制剂，并提供该制剂联合免疫检查点抑制剂治疗癌症的方法，属于生物医药领域。

背景技术

免疫检查点阻断治疗是目前肿瘤免疫疗法的热点，CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞相关抗原)、PD-1(程序性细胞死亡蛋白1)和PD-L1(PD-1配体1)是目前研究较清楚的免疫检查点分子，针对这些免疫检查点分子的抗体能阻断相关信号通路，增强内源性抗肿瘤免疫效应，这些抗体分子即为免疫检查点抑制剂。虽然免疫检查点阻断治疗在临床应用中带来持久的肿瘤抑制作用，但仅对部分患者有效，目前通常在未经挑选的实体瘤中，单独使用的应答率为15-20％，如何提高免疫检查点抗体药物应答率是目前面临的主要难题。目前医学研究认为，免疫检查点阻断治疗的持续治疗能带来更好的治疗效果，然而在有限的免疫检查点应答患者中，强烈的副反应如严重的消化道不良反应、皮肤剧烈瘙痒、肝损伤、肺炎、肾功能损害等使得这些患者不得不中止免疫治疗，从而无法获得预期的临床受益。

本发明人经过研究发现，凝结芽孢杆菌能够有效诱导抗肿瘤免疫，增加免疫检查点抑制剂应答率和治疗效果，降低副作用，延长生存期，效果优于双歧杆菌，且未见相关研究报道，特申请此发明专利。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够有效诱导抗肿瘤免疫、增加免疫检查点抑制剂应答率和治疗效果并降低副作用的制剂，该制剂主要由凝结芽孢杆菌制成。

本发明的微生态制剂的制备优选是通过下述步骤实施的，但不局限于此制备工艺，公知的能实现的制备工艺均可以：采取可能含凝结芽孢杆菌的样品，然后将样品置于灭菌瓶内，研究时从中取一定量的样品加入18mL灭菌的稀释液中，充分混匀，在无菌操作台内，进行10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7梯度稀释，取10^-5、10^-6、10^-7三个稀释梯度，分别涂布于凝结芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基上，置于培养箱，37℃下培养48小时，选择长势良好的单菌落分别接种于液体扩增培养基中，置于培养箱内，37℃下扩增培养48小时。将所得培养液离心(12000rpm)分离出菌体后，将菌体冷冻真空干燥，调制出干燥菌粉，然后根据《伯杰细菌鉴定手册》、相关细菌鉴定文献或16S rRNA序列对比分析进行凝结芽孢杆菌鉴定和毒性试验，将无毒性的凝结芽孢杆菌干燥菌粉按需要比例添加辅料制成片剂、胶囊、散剂、粉剂或液体制剂等各种剂型，也可加入其他活菌或低聚果糖、低聚木糖等低聚糖起到协同作用。

凝结芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基优选但不局限于：纯化水1000mL，蛋白胨10g，牛肉浸取物10g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，酵母粉5g，葡萄糖5g，磷酸二氢钾2g，吐温801.0ml，碳酸钙20g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，琼脂15g，调pH 6.2-6.5，115℃高压灭菌20min。

凝结芽孢杆菌液体扩增培养基优选但不局限于：纯化水1000mL，蛋白胨10g，牛肉浸取物3g，氯化钠5g，葡萄糖5g，调pH 7，115℃高压灭菌20min。

为进一步具体说明本发明，发明人利用上述方法通过凝结芽孢杆菌选择性单菌落分离固体培养基分离鉴定出了无毒性的凝结芽孢杆菌，本发明所述凝结芽孢杆菌并不局限于为说明本发明所述的菌，只要无毒性的凝结芽孢杆菌均是本发明所述，均在本发明的保护范围内。