[发明专利]一种猪圆环病毒3型感染性克隆的构建及鉴定方法有效
| 申请号： | 201910341731.5 | 申请日： | 2019-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN110195071B | 公开（公告）日： | 2022-09-30 |
| 发明（设计）人： | 蒋再学;罗满林;吴佳俊;蒋梅;卜婉迪 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/34 | 分类号： | C12N15/34;C12N15/66;C12Q1/686;C12Q1/70;C12R1/93 |
| 代理公司： | 桂林市华杰专利商标事务所有限责任公司 45112 | 代理人： | 杨雪梅 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 圆环 病毒 感染性 克隆 构建 鉴定 方法 | ||
1.一种猪圆环病毒3型感染性克隆的构建方法，其特征在于：其步骤包括：
（1）将NCBI公布的猪圆环病毒3型线性DNA序列在 snapgene软件上成环；
（2）对猪圆环病毒3型成环后DNA独立酶切位点的筛选：筛选具有单一酶切位点的位置进行开环；
（3）对开环后的猪圆环病毒3型 DNA序列进行改造：在开环后的线性DNA序列末端添加酶切位点，得到重排后的线性猪圆环病毒3型 DNA序列，其DNA序列如序列表中的序列7所示；
（4）对重排后的线性猪圆环病毒3型 DNA序列进行PCR扩增、纯化、酶切、纯化、连接、再纯化后构建完成。
2.权利要求1构建的猪圆环病毒3型感染性克隆的PCR鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
（2.1）猪圆环病毒3型感染性克隆的Western blot检测；
（2.2）猪圆环病毒3型感染性克隆感染细胞后的形态观察；
（2.3）猪圆环病毒3型感染性克隆的PCR检测，包括以下步骤：
（2.3.1）使用1%核酸电泳对成环后的猪圆环病毒3型环状DNA进行检测；
（2.3.2）猪圆环病毒3型环状DNA转染于敏感细胞系；
（2.3.3）使用改造后的引物对感染性克隆进行PCR检测，改造后的引物序列为：
（2.3.4）根据猪圆环病毒3型 Cap基因的反向互补基因设计检测引物，对猪圆环病毒3型感染性克隆感染的细胞进行PCR检测，所述的检测引物序列为：
。
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