[发明专利]一种炔基修饰的脱氧腺苷亚磷酰胺单体及其制备方法

说明书

本发明属于医药技术领域，公开了炔基修饰的脱氧腺苷亚磷酰胺单体化合物的合成方法及其应用。本发明将脱氧腺苷的N6位进行羧基化，再经过炔基修饰得到中间体，经过5'端羟基的保护和2'端亚磷酰胺化两步反应得到炔基修饰脱氧腺苷亚磷酰胺单体化合物。通过DNA的固相合成，将其定点导入到寡聚核苷酸中得到特定位点炔基修饰的寡聚核苷酸。本发明将炔基修饰的脱氧腺苷亚磷酰胺单体化合物应用于寡聚核苷酸炔基修饰，方法简单，产率可观。为后续DNA的功能化提供了新的思路和有价值的中间体，应用前景广泛。

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及炔基修饰的脱氧腺苷亚磷酰胺单体化合物,尤其涉及腺嘌呤碱基部位炔基修饰的脱氧腺苷亚磷酰胺单体化合物,本发明还涉及所述含炔基修饰的腺苷亚磷酰胺单体化合物的制备方法及其应用。

背景技术

近年来伴随着核酸化学合成技术的发展，学术界及产业界报道了一系列化学修饰的寡核苷酸衍生物。寡核苷酸的化学修饰包括对糖环的、碱基部位的修饰、磷酸二酯骨架的修饰，或将具有特定功能的化学结构替代天然核苷等等。这些修饰方法及所报道的寡核苷酸衍生物为反义核苷酸，核酸适配体，小干扰RNA等核酸类仿生药物的研发及基于核酸的生物医学诊断提供了重要的物质基础。

另一方面，随着“绿色化学”逐渐走进人们的视野，并逐渐成为有机合成化学领域的研究热点。如何减少有毒副产物的产生，受到化学研究工作者的高度重视。2001年，化学家K.B.Sharpless等引入“点击反应”概念。“点击反应”具有副产物毒性小，反应速度快，操作简单，反应条件温和且反应产率高等一系列优点。“点击反应”共有四种类型，分别是环加成反应，亲核开环反应，非醇醛的羰基化学以及碳碳多键的加成反应。其中叠氮端炔环加成反应，可以在一价铜离子催化下，快速将端炔与叠氮基偶联生成区域选择性的1,4-二取代-1,2,3-三氮唑，并具有很好的生物正交性。因此，该反应已经被广泛用于有机合成及化学生物学领域。本发明设计一类新型的炔基修饰的脱氧腺苷亚磷酰胺单体，并通过DNA固相合成技术制备炔基修饰的寡核苷酸，为将来通过环加成“点击反应”实现DNA分子的功能化提供新的途径和分子工具。

目前关于寡聚核苷酸的碱基修饰共分为两类，一类是基于天然碱基的结构进行化学修饰，另一类是基于非天然碱基的结构进行化学修饰。近些年来关于非天然碱基的化学修饰的文献报道较多，其中碱基部位炔基修饰的脱氧核苷类似物也有一些报道。例如德国奥斯纳布吕克大学F.See la等报道了脱氧腺苷的碱基位置8号位N，7号位去N并在碱基7号位引入炔基修饰物的脱氧腺苷亚磷酰胺单体。但是含非天然碱基脱氧核苷的合成方法复杂、步骤多，成本高，制约了其在DNA标记及功能化方面的实际应用。所以本发明选择廉价易得的含天然碱基的脱氧腺苷作为底物，设计合成一种新型炔基修饰脱氧腺苷亚磷酰胺化合物及炔基修饰的寡核苷酸DNA。本发明的炔基修饰脱氧腺苷亚磷酰胺化合物的合成路线短，方法简便，成本低廉，可用于基于点击反应的DNA标记和功能化，在核酸类仿生药物的研发及基于核酸的生物医学诊断方面具有较好的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型炔基修饰的脱氧腺苷亚磷酰胺单体化合物及炔基修饰的寡核苷酸DNA。

本发明首先公开了一种炔基修饰的脱氧腺苷亚磷酰胺单体化合物,其为式I所示结构的化合物：

其中：

R₁为H，C₁-C₄烷基；

R₂为H，C₁-C₄烷基；

R₃为4,4'-二甲氧基三苯基或4-甲氧基三苯基；

所述炔基修饰的脱氧腺苷亚磷酰胺单体化合物中，进一步优选：

R₁为H，甲基，乙基或异丙基；