[发明专利]一种Ce6标记的双链抗菌肽及其合成方法和应用

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种Ce6标记的双链抗菌肽及其合成方法和应用，该抗菌肽为双链多肽，其氨基酸序列为：本发明还通过引入光敏剂Ce6进行光动力抗菌化学疗法(PACT)抗菌，利用它在激光的照射下产生活性氧(ROS)导致微生物分子氧化并导致细胞损伤和死亡，与抗菌肽(AMP)产生协同作用。本发明还公开了此抗菌肽的合成方法及其在治疗金黄色葡萄球菌感染的药物开发或抗菌剂中的应用。采用固相化学法合成，与传统单链抗菌肽相比具有序列短、结构稳定、抗菌活性强、合成方便的优点。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具有抗菌性能以及光动力治疗潜力的新型抗菌剂。

背景技术

自青霉素于20世纪40年代首次引入医疗实践以来，已开发出大量各种抗生素以成功地抑制临床中的细菌感染疾病。然而，在医学治疗中已广泛报道了细菌对大多数抗生素产生抗性，并且目前已成为对公众健康的严重威胁。因此，迫切需要设计新型抗微生物剂和替代治疗策略，其可有效杀死具有强效耐药性的细菌菌株。

微生物灭活的一种是基于光动力抗菌化学疗法(PACT)有希望的方法，当使用Ce6作为光敏剂(PS)激活活性氧时(暴露在合适的波长)。活化的单线态氧物质可以用作高反应性氧化剂，并且能够破坏紧密接近的细胞壁和膜，从而导致细胞死亡。

抗菌肽是生物体内经诱导而产生的一类具有抗菌活性的碱性多肽物质，分子量在2000～7000左右，由20～60个残基组成。这类活性多肽多数具有强碱性、热稳定性以及广谱抗菌等特点。抗菌肽的抑菌机理与抗生素不同，它是通过物理渗透作用于细菌细胞膜，破坏膜上磷脂双分子层，从而使膜内物质外流，导致细菌死亡，因此，抗菌肽不产生耐药性。此外，抗菌肽本身是一种多肽类物质，能够在生物体内有效降解，不存在残留性问题，所以抗菌肽是抗生素最理想的替代物，具有极为广阔的市场应用前景。但现有天然抗菌肽在动物体内含量极微，且从动物体内提取抗菌肽产量低、耗时长、工艺复杂、成本高，这限制了天然抗菌肽进入应用。

发明内容

近年来，人工合成多肽的医疗效果引起了人们的高度关注。其中抗菌肽可以作为一种新型的抗生素，把细胞膜作为主要靶点，通过在细胞膜上聚集使其丧失其屏蔽功能，进而导致细胞死亡。

本发明的目的在于：为了解决现有技术中的不足，提供了一种结构简单，抗菌活性高的双链抗菌肽的合成方法及其应用，本发明合成的双链抗菌肽具有较好的抗菌效果，在抑菌、杀菌以及光动力抗菌化学疗法(PACT)等领域均有广泛的应用前景。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供的抗菌肽的氨基酸序列为：

本发明还提供了抗菌肽的合成方法，包括：

(1)采用固相合成法合成双链抗菌肽；

(2)Ce6标记抗菌肽(AMP-Ce6)。

抗菌肽的合成方法具体为：

1、基本材料：

固相Fmoc法选择的树脂为Rink-Amide-MBHA-Resin树脂。这种树脂成本低廉且具有非常好的溶胀性，可以使肽链之间更好地进行缩合反应，且有足够的网络空间满足不断增长的肽链。采用HBTU和HOBt作为连接分子，将多肽分子固定到树脂上。

2、反应步骤：

第一步，树脂预处理。

取100mg树脂(MBHA)和DMF于反应容器中，混合1h后，抽滤。用20％哌啶(溶于DMF)切割保护基团。

第二步，将第一个氨基酸共价连接到树脂上。