[发明专利]黄参茎叶中木樨草素-7-O-葡萄糖甙的高效液相色谱-串联质谱检测方法

说明书

本发明涉及一种黄参茎叶中木樨草素‑7‑O‑葡萄糖甙的高效液相色谱‑串联质谱检测方法。本发明样品为经超声辅助提取和X‑5型大孔树脂纯化后所得流出液经冷冻干燥后的黄参茎叶多酚纯化物冻干粉，纯度为42.38％；采用250‑4反相C18柱分离，使用A：甲醇：冰乙酸，B：甲醇：冰乙酸：超纯水作为流动相进行梯度洗脱，使用电喷雾离子源负离子，一级质谱MS2scan模式进行全扫检测；二级质谱production模式检测，外标法定量，结果表明：所使用标准品木樨草素‑7‑O‑葡萄糖甙标准溶液在0～50mg/L范围内线性关系良好，相关系数为0.9999，三个添加量水平的回收率分布在95～102％左右，相对标准偏差较低。本发明具有较高灵敏度、精确度和稳定性，适用于黄参茎叶中四种多酚成分的定性和定量检测。

一、技术领域：

本发明涉及检测方法技术领域，具体涉及一种黄参茎叶中木樨草素-7-O-葡萄糖甙的高效液相色谱-串联质谱检测方法。

二、背景技术：

多酚是一类重要的植物次生代谢产物，近年来，针对多酚生物活性的研究十分广泛，大量研究证明多酚在多种疾病如心脑血管疾病、肥胖症、高血压、高血脂、糖尿病一级神经功能障碍等方面有显著功效。然而，研究证实，多酚所具有的生物活性与其化学组成紧密相关。只有在明确其物质结构的基础上才能进行构效关系、生物活性等方面的研究。因此，分离纯化得到多酚之后，必须首先对多酚组成进行鉴定。多酚的结构鉴定和分析非常复杂，一般使用一种方法很难奏效，往往需要结合多种鉴定方法才能完成该工作。

近年来，高效液相色谱(HPLC)与质谱(MS)技术相结合的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)的技术，因其对未知物质良好的鉴定能力和极高的检测限，在植物多酚组分分析中得到了广泛的应用。HPLC-MS/MS技术是利用HPLC分离样品，MS检测样品，在HPLC部分，目标物质与其他混合物分离开，之后进入MS，经过一级质谱后，根据质核比将目标物质与其它干扰物质彻底分离，继续利用二级质谱进行定性定量检测。

目前未有对黄参茎叶中多酚类成分的定性定量研究报告，因此，建立可靠、准确的黄参茎叶多酚含量测定方法，对研究黄参茎叶多酚类化合物的化学组成及生物活性具有重要的意义。

三、发明内容

本发明的提供一种黄参茎叶中木樨草素-7-O-葡萄糖甙的高效液相色谱-串联质谱检测方法，具有较高灵敏度、精确度和稳定性，适用于黄参茎叶中木樨草素-7-O-葡萄糖甙的定性和定量检测。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种黄参茎叶中木樨草素-7-O- 葡萄糖甙的高效液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于：所述的方法包括以下的步骤：

(1)标准样品的制备

木樨草素-7-O-葡萄糖甙(L7G)标准液：1mg木樨草素-7-O-葡萄糖甙，甲醇溶解定容至10mL，低温保存备用，使用时，用含有2％甲酸的50％甲醇溶液将其分别稀释配制为0mg/L，5mg/L，10mg/L，20mg/L，40mg/L，50mg/L 的标准溶液，置于-20℃冰箱保存；

(2)检测样品的制备

将黄参茎叶进行清洗烘干粉碎、过60目筛得到黄参茎叶粉末，再将粉末通过超声辅助法得到黄参茎叶多酚粗提物，经大孔吸附树脂分离纯化，得到黄参茎叶多酚纯化物，黄参茎叶多酚纯化物用色谱级甲醇配置为浓度为1mg/mL的黄参茎叶多酚溶液，过0.45μm水系滤膜，样品放置于-20℃冰箱保存待测；

(3)色谱条件

色谱柱：Merk公司，250-4反相C18柱，250×4.6mm,5μm；流动相组成：A：甲醇：冰乙酸的体积比为99.7:0.3，B：甲醇：冰乙酸：超纯水的体积比为10:0.3:89.7；液相洗脱梯度：洗脱条件为：0～10分钟：A，30％；B，70％；10～60分钟：A，30％～44％；B，70％～56％；进样量：10μL；柱温： 30℃；流速：0.4mL；紫外检测波长：280nm；