[发明专利]桑黄液体深层发酵培养工艺

权利要求书

1.一种桑黄液体深层发酵培养工艺，其特征在于：它包括以下步骤：

(1)桑黄菌种活化；

(2)制备桑黄种子悬液；

(3)一级发酵培养：将步骤(2)所得的桑黄种子悬液接种于含有发酵培养基的三角瓶中进行扩大培养，得一级液体菌种；

(4)二级发酵培养：将步骤(3)所得的一级液体菌种接种于含有发酵培养基的三角瓶中进行再次扩大培养，得二级液体菌种；

(5)发酵罐培养：在5L的发酵罐中加入2-3L的发酵培养基以及占发酵培养基体积3％-5％的桦褐孔菌发酵液，之后将步骤(4)所得的二级液体菌种转接入发酵罐中，接种量为10％-15％，在通气量为1:0.5-1.5vvm，温度为25-30℃，罐压为0.02-0.04MPa下发酵培养5-7天，得桑黄液体发酵产物；

其中，所述发酵培养基为溶液A与榆树皮提取液按体积比为10-15:1混合后，调节pH值为5.8-6.0，再经121-122℃，湿热灭菌10-20min后，所得的混合液；

所述溶液A为双孢蘑菇罐藏加工废水经离心、浓缩至溶液折光率达到15％-20％，所得的溶液；

所述桦褐孔菌发酵液为利用溶液A对桦褐孔菌进行发酵培养后，经过滤、灭菌、浓缩所得的发酵液；

其中，所述榆树皮提取液的制备方法为：

1)酶解：将榆树皮粉碎成粉末后，倒入酶解罐中，同时向酶解罐中加入水、pH为7.0-7.2磷酸盐缓冲溶液，搅拌5-7min，其中，榆树皮与水的料液比为1:2-1:3g/mL，水与磷酸盐缓冲溶液的体积比为10:1-12:1；之后，再向酶解罐中依次加入占榆树皮重量的0.1％-0.3％的果胶酶、占榆树皮重量的0.3％-0.5％的纤维素酶、占榆树皮重量的0.2％-0.4％的半纤维素酶，控制酶解罐温度在45-55℃，搅拌反应2-3h，之后将温度升至90-100℃，加热20-30min，再降温至室温，过滤，收集滤液B；

2)离心分离：步骤1)所得的滤液B放入离心机中离心，收集上清液；其中，离心时，离心机的转速控制在11500-12500rpm之间，离心温度为15-25℃，离心时间为20-30min；

3)将步骤2)所得上清液浓缩至溶液中可溶性固形物浓度达20％-30％，得所述榆树皮提取液；

所述桦褐孔菌发酵液的制备方法为：在5L的发酵罐中加入2-3L的桦褐孔菌培养基，之后将桦褐孔菌种子悬液接种于发酵罐中，接种量为10％-15％，在通气量为1:0.5-1.5vvm，温度为27-30℃，罐压为0.01-0.03MPa下发酵培养8-10天，过滤，收集发酵液，发酵液经高压灭菌后浓缩至溶液折光率达35％-40％，即为所述桦褐孔菌发酵液；其中，桦褐孔菌培养基为榆树木屑与溶液A按料液比为10:1-15:1g/L混合后所得培养基。

2.根据权利要求1所述的桑黄液体深层发酵培养工艺，其特征在于：所述溶液A的制备方法为：

a.收集双孢蘑菇罐藏加工过程中所产生的工业废水；

b.将收集来的双孢蘑菇罐藏加工过程中所产生的工业废水进行离心，取上清液；离心时，离心机的转速控制在11500-12500rpm之间，离心温度为20-25℃，离心时间为15-20min；

c.将所得的上清液利用降膜蒸发器，降膜蒸发浓缩，浓缩至溶液折光率达到15％-20％，得溶液A。

3.根据权利要求1所述的桑黄液体深层发酵培养工艺，其特征在于：所述桦褐孔菌种子悬液的制备方法为：先将保存的桦褐孔菌菌种转接至含有PDA固体培养基的斜面上，在27-30℃活化5-7d；之后，用接种针勾取4块0.5cm²大小的活化后的桦褐孔菌菌株接种于250mL的三角瓶中，加入100mL的PDA液体培养基，然后用脱脂棉塞封住瓶口，摇床转速设定为180-200rpm，在27-30℃的条件下振荡培养10-12d，得所述桦褐孔菌种子悬液。

4.根据权利要求1所述的桑黄液体深层发酵培养工艺，其特征在于：步骤(1)的具体方法为：将保存的桑黄菌种转接至含有PDA固体培养基的斜面上，在25-30℃活化6-8d。