[发明专利]灰树花液体深层发酵培养及其多糖的提取以及多糖的应用

权利要求书

1.一种灰树花液体深层发酵培养工艺，其特征在于：它包括以下步骤：

(1)灰树花菌种活化；

(2)制备灰树花种子悬液；

(3)一级发酵培养：将步骤(2)所得的灰树花种子悬液接种于含有发酵培养液A的三角瓶中进行扩大培养，得一级液体菌种；

(4)二级发酵培养：将步骤(3)所得的一级液体菌种接种于含有发酵培养液A的三角瓶中进行再次扩大培养，得二级液体菌种；

(5)发酵罐培养：在5L的发酵罐中加入2-3L的发酵培养液C，之后将步骤(4)所得的二级液体菌种转接入发酵罐中，接种量为发酵罐中发酵培养液C体积的8％-10％，在通气量为1：0.1-1.0vvm，温度为25～30℃，罐压为0.03-0.1MPa下发酵培养2-4天，之后放出并回收占发酵罐容积的20％-30％的发酵液，补入等同体积的发酵培养液A，继续发酵2-4天，接着再放出并回收占发酵罐容积的20％-30％的发酵液，补入等同体积的发酵培养液A，再发酵1-3天后放罐，发酵醪经过滤，得灰树花菌发酵液以及灰树花菌丝体；

其中，所述发酵培养液A为双孢蘑菇罐藏加工废水依次经浓缩、醇沉、过滤收集滤液、滤液浓缩至滤液中可溶性固形物浓度达1％-3％后所得的溶液；

所述发酵培养液C为发酵培养液A与发酵培养液B按体积比为20:1-30:1混合后所得的混合液；所述发酵培养液B为双孢蘑菇罐藏加工废水依次经浓缩、醇沉、过滤收集沉淀、沉淀溶于水形成的折光率达35％～40％的溶液。

2.根据权利要求1所述的灰树花液体深层发酵培养工艺，其特征在于：所述发酵培养液A与发酵培养液B的制备方法为：

a.收集双孢蘑菇罐藏加工过程中所产生的工业废水；

b.将收集来的双孢蘑菇罐藏加工过程中所产生的工业废水进行离心，取上清液；

c.将所得的上清液利用降膜蒸发器，降膜蒸发浓缩，浓缩至溶液折光率达到35％～55％，得浓缩液A；

d.在浓缩液A中加入95％-100％的乙醇进行醇沉，之后过滤回收醇沉后所得的沉淀并收集滤液；其中，醇沉时加入乙醇的体积与浓缩液A的体积比为1:1～2:1；

e.将步骤d收集的滤液进行旋转蒸发浓缩并除去乙醇，旋转蒸发浓缩至滤液中可溶性固形物浓度达1％-3％，然后将浓缩后的滤液pH调节至6.0-6.5，再经121-122℃，湿热灭菌10-20min后，得所述发酵培养液A；

f.将步骤d回收的沉淀溶解于水，并使溶解所得的溶液折光率达到35～40％，之后将溶解所得的溶液在121-122℃下，湿热灭菌10-20min后，得所述发酵培养液B。

3.根据权利要求1所述的灰树花液体深层发酵培养工艺，其特征在于：步骤(1)的具体方法为：将保存的灰树花菌种转接至含有PDA固体培养基的斜面上，在25-28℃活化5-7d。

4.根据权利要求1所述的灰树花液体深层发酵培养工艺，其特征在于：步骤(2)的具体方法为：用接种针勾取0.5cm²大小的活化后的灰树花菌株接种于250mL的三角瓶中，加入100mL的PDA液体培养基，接种5～6次，然后用脱脂棉塞封住瓶口，摇床转速设定为200-250rpm，在25-28℃的条件下振荡培养5-7d，得所述灰树花种子悬液。

5.根据权利要求1所述的灰树花液体深层发酵培养工艺，其特征在于：步骤(3)的具体方法为：将85-95ml发酵培养液A置于250mL的三角瓶中；接着将步骤(2)所得的灰树花种子悬液接种于三角瓶中，接种量为三角瓶中发酵培养液A体积的3％-5％，接种之后在25-30℃，转速为150-200rpm，持续培养5-7d，得一级液体菌种。

6.根据权利要求1所述的灰树花液体深层发酵培养工艺，其特征在于：步骤(4)的具体方法为：将200-250mL发酵培养液A置于500mL的三角瓶中；接着将步骤(3)所得的一级液体菌种接种于三角瓶中，接种量为三角瓶中发酵培养液A体积的10％-15％，接种之后在25-30℃，转速为150-200rpm，持续培养5-7d，得二级液体菌种。