[发明专利]一种用于抗躁狂药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种用于抗躁狂药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法。本发明采用多重PCR结合片段长短/质量分析方法，同步快速定性检测与抗躁狂药物用药相关的GSK3B和NTRK2基因上2个单核苷酸多态性(SNP)位点。检测步骤：(1)采集口腔脱落细胞保存于细胞采集卡，或采集血液样本并提取核酸；(2)采用步骤1所述细胞采集卡或核酸为模板进行多重PCR扩增；(3)按PCR产物片段长短/质量同步分离2个SNP位点、3个人类基因组DNA内参基因及1个PCR反应内参的PCR产物；(4)结果分析判读。本发明的优势是快速、灵敏度高、重复性好、特异性强、通量高、成本低。

技术领域

本发明涉及一种多重基因检测试剂盒，具体涉及一种用于抗躁狂药物用药指导的多重基因检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

躁狂症是一种情感性精神障碍疾病，该病的基本特征为患者思维奔逸、情绪高涨、言语动作较平常增多，主要的临床表现是易激惹以及情绪高涨。躁狂症往往兼有抑郁发作，因此躁狂症已被列为双相情感障碍的一种。大多数躁狂症患者会呈现反复发作，严重患者还会伴随幻觉、妄想等精神病性症状。

药物治疗是治疗躁狂症的主要方法。随着对躁狂症发病生理机制逐渐被揭示，抗躁狂症类药物的开发也取得的飞速的发展。临床上常使用心情稳定剂联合其他药物治疗躁狂症。心境稳定剂包括锂盐、卡马西平和丙戊酸盐。锂盐是最主要的抗躁狂药物，但其治疗窗窄，药物过量会导致严重不良反应，而药量过低又会使治疗效果不佳。研究表明，GSK3B基因多态性影响锂盐的代谢，NTRK2基因多态性影响丙戊酸盐的治疗效果，应根据患者基因型适当调整药物剂量。

人类基因组80％以上基因多态性都是单核苷酸多态性(Single Nucleotidepolymorphism，SNP)。SNP指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性，包括碱基转换、颠换、缺失和插入。与药物相关的基因SNP位点发生突变可使对应的酶活性发生变化，从而影响药物代谢、转运或靶点结合，导致药物疗效不佳，甚至发生严重毒副反应。因此，通过对抗躁狂用药相关的SNP位点进行检测，为患者量身定制一套用药方案，可提高治疗效率，减轻躁狂症患者的医疗负担和痛苦，节省大量医院及社会资源(见表1)。

表1抗躁狂药物用药指导相关基因

目前市场上，SNP分型检测技术主要有三种：测序法、荧光定量 PCR法、基因芯片法：

(1)荧光定量PCR法

荧光定量PCR采用荧光淬灭及双末端标记技术，针对SNP位点设计特异性的探针，具有灵敏度高、准确性高和特异性高等优势。但荧光定量PCR通量低，若要同时检测多个个SNP位点，需要分管检测，操作复杂，样品用量大，难以适应临床需求。此外，荧光定量 PCR难以设置内参质控，无法避免假阳性和假阴性。

(2)基因芯片法

基因芯片是通过微加工技术，将数以万计的特定序列的DNA片段(基因探针)有规律地排列固定于硅片、玻片等支持物上，构成的一个二维DNA探针阵列，利用这类芯片与标记的生物样品进行杂交，可对样品的基因表达谱生物信息进行快速定性和定量分析。其优点是通量高、操作简便；缺点是检测成本昂贵、重复性差、灵敏度较低。芯片的种类较多，难以制定一个统一的质量控制标准也限制了基因芯片技术的普及。

(3)测序法

Sanger测序法是SNP分型金标准，不仅能检测已知SNP，也能发现未知SNP。但Sanger测序法操作复杂，成本较高。当测序位点较多时需要逐个位点测序，耗时长，累计价格相对昂贵。二代测序技术实现了边合成边测序，具有高通量、高效率的优势，然而二代测序平台价格昂贵、普及度低，作为SNP检测技术在临床上的应用还不够成熟。

由于与抗躁狂药物用药相关的基因SNP数量较多，以上技术均具有明显局限性，因此很难应用于抗躁狂药物用药指导的多重基因检测。