[发明专利]一种针对EGFR L858R基因突变的特异性T细胞受体及其应用

说明书

本发明提供一种针对EGFR L858R基因突变的特异性TCR及其应用，所述TCR具有结合衍生自EGFR L858R基因突变的新抗原肽KITDFGRAK‑HLA‑A*1101复合物的特性，所述TCR包含α链和β链的可变区和恒定区。经过该类TCR修饰的T细胞具有对EGFR L858R基因突变的HLA‑A*1101肿瘤细胞的特异性杀伤作用。另外，本发明还提供了用于治疗涉及表达所述基因突变的肿瘤的药物组合，具有特异性强，个体化治疗效果好的特点。

技术领域

本发明涉及基因工程及肿瘤免疫治疗领域，具体涉及一种针对EGFR L858R基因突变的特异性T细胞受体及其应用。

背景技术

肿瘤免疫治疗是通过重新启动并维持肿瘤-免疫循环，恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应，从而控制与清除肿瘤的一种治疗方法。TCR(T cell receptor)疗法即T细胞受体疗法，在该疗法中，分离出内源的T细胞，加以工程化改造，并输注回人体。这样一来，带有靶向癌细胞能力的T细胞数量将大增。这种方法除了能像细胞毒性化疗和靶向治疗快速杀灭肿瘤外，还避免了疫苗和免疫检查点抑制剂疗法的延迟效应。TCR-T是继肿瘤手术、放疗、化疗、靶向治疗之后的最有发展前景的肿瘤治疗技术之一，无论是国际还是国内都是目前肿瘤免疫治疗的研究热点。

T细胞受体(简称TCR)是所有T细胞表面的特征性标志，具有识别抗原呈递细胞(APC)上人类主要组织相容性复合体(MHC)分子-抗原肽复合体的能力。TCR是由α、β两条肽链构成的异二聚体，每条肽链分为可变区(V区)、恒定区(C区)、跨膜区和胞质区等几部分；其胞质区很短，信号传递主要通过与其以非共价键结合的CD3分子进行。TCR分子属于免疫球蛋白超家族，其抗原特异性存在于V区；V区又各有三个高变区CDR1、CDR2、CDR3，其中以CDR3变异最大，直接决定了TCR的抗原结合特异性。在TCR识别MHC-抗原肽复合体时，CDR3可直接与抗原肽相结合。

TCR在识别APC或者靶细胞上的MHC分子所提呈的抗原肽时，既要识别抗原肽，同时也要识别自身MHC分子的多态性部分，此现象即MHC限制性。T细胞通过特异性 T细胞受体识别肿瘤细胞表面抗原肽-MHC复合体而被激活，活化后的T细胞可以直接溶解肿瘤细胞，或通过分泌细胞因子如干扰素、肿瘤坏死因子等抑制肿瘤生长。CD8+T 细胞介导的特异性MHC-I类分子限制细胞免疫功能，在抗肿瘤免疫中尤其重要。

HLA(human lymphocyte antigen，人类淋巴细胞抗原)，受控于MHC的基因簇，是具有高度多态性的同种异体抗原，是目前所知人体最复杂的遗传多态性系统，有几十个基因座位，每个基因座位又有几十个等位基因，且呈共显性表达。HLA有A、B、C、 D和DR 5个位点，分别称为HLA-A，HLA-B，HLA-C，HLA-D和HLA-DR。

EGFR(epidermal growth factor receptor family)人类表皮生长因子受体家族属于酪氨酸激酶受体家族，也被称作HER家族或erbB家族。EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。EGFR等蛋白酪氨酸激酶功能缺失或其相关信号通路中关键因子的活性或细胞定位异常，均会引起肿瘤、糖尿病、免疫缺陷及心血管疾病的发生。EGFR诱导癌症至少通过3种机制：EGFR配体的过表达、EGFR的扩增或 EGFR的突变活化，其中以EGFR的突变活化为主要机制。EGFR基因是由28个外显子组成，其中外显子18-21是常见的基因突变位点，也是与易瑞沙等EGFR-TKI结合的位点。通常来说，EGFR的外显子19缺失和外显子21的L858R两个突变对于易瑞沙靶点是敏感的。因此EGFR的外显子19缺失和外显子21的L858R突变可以作为肿瘤患者是否适用EGFR-TKI的一个重要的判断标准，其中L858R基因突变，也就是EGFR蛋白的第858个氨基酸从L(亮氨酸)突变成了R(精氨酸)。