[发明专利]检测甲型肝炎病毒IgM抗体的酶标板、试剂盒以及制备方法

说明书

本发明公开了一种检测甲型肝炎病毒IgM抗体的酶标板、试剂盒以及制备方法，涉及甲型肝炎病毒检测技术领域。本发明提供了的酶标板的制备方法包括：包被步骤、封闭步骤和干燥步骤，并通过对试剂浓度和各步骤参数的优化，使得采用上该方法制备的酶标板可以用于甲型肝炎病毒IgM抗体的检测，具有较好的特异性和灵敏度，灵敏度达95.4％，特异性达98.9％。

技术领域

本发明涉及甲型肝炎病毒检测技术领域，具体而言，涉及一种检测甲型肝炎病毒IgM抗体的酶标板、试剂盒以及制备方法。

背景技术

甲型病毒性肝炎：简称甲型肝炎、甲肝，是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的，以肝脏炎症病变为主的传染病，主要通过粪-口途径传播，临床上以疲乏，食欲减退，肝肿大，肝功能异常为主要表现，部分病例出现黄疸，主要表现为急性肝炎，无症状感染者常见。任何年龄均可患本病，但主要为儿童和青少年。成人甲肝的临床症状一般较儿童为重。冬春季节常是甲肝发病的高峰期。本病病程呈自限性，无慢性化，引起急性重型肝炎者极为少见，随着灭活疫苗在全世界的使用，甲型肝炎的流行已得到有效的控制。

甲型肝炎病毒：HAV是小核糖核酸病毒科的一员，为嗜肝RNA病毒属。HAV经口进入体内后，经肠道进入血流，引起病毒血症，约过一周后到达肝脏，随后通过胆汁排入肠道并出现粪便中。粪便排毒能维持1-2周。病毒侵犯的主要器官是肝脏，咽部和扁桃体可能是HAV肝外繁殖的部位。HAV引起肝细胞损伤的机制尚未明确，一般认为HAV不直接引起肝细胞病变，肝脏损害是HAV感染肝细胞的免疫病理反应所引起的。

甲型肝炎传染源：甲型肝炎患者和无症状感染者为传染源，甲型肝炎患者仅从粪便中排出病原体，血液中HAV主要出现在黄疸发生前14～21天，在此期患者的血液有传染性，有报道通过输血传播，但黄疸发生后患者血液通常无传染性。患者在起病前2周和起病后1周从粪便中排出HAV的数量最多，此时传染性最强。但至起病后30天仍有少部分患者从粪便中排出HAV。

甲型肝炎传播途径：甲型肝炎以粪口途径为主要传播途径，粪口传播的方式是多样的，一般情况下，日常生活接触传播是散发性发病的主要传播方式，因此在集体单位如托幼机构，学校和部队中甲型肝炎发病率高。水和食物的传播，特别是水生贝类如毛蚶等是甲型肝炎爆发流行的主要传播方式。

甲型肝炎易感性与免疫力：人群未注射甲肝疫苗者对HAV普遍易感，患过甲型肝炎或感染过甲型肝炎病毒的人可以获得持久的免疫力。

甲型肝炎实验室诊断方法：实验室检测方法主要有病毒分离、免疫学检测、核酸检测等。病毒分离培养方法操作复杂，免疫学检测常用ELISA、胶体金、化学发光法，核酸检测常用荧光定量PCR法。

ELISA实验技术：ELSIA在临床诊断、食品安全、科学研究等领域都有着广泛的应用。它可以简单快捷低成本地进行抗原抗体的定性或定量检测，高等生物的IgG、IgM、IgA、IgE等抗体都可以采用该方法检测，各种天然和人工制备的抗原可以采用该方法准确测定。抗原抗体的特异性结合反应保证了该方法实验结果的准确性和可靠性。许多商业化的公司早已将其制备成数以万计的各种商品化试剂盒。ELISA试剂盒的组成部分通常包括：酶标板、样品稀释液、酶标试剂、显色剂、终止液。根据试剂盒的设计原理不同，其组成部分略有差异。

ELSIA试剂盒的质量控制：为保证用于体外诊断的ELSIA试剂盒能够做到质量均一，减小不同批次产品制造过程的批间差，试剂盒制造厂家通常设置企业参考品进行监控，使得不同时间段分不同批次制备的同品种试剂盒反应性能指标能够实现标准化，保证实验结果的前后一致性。同时在实验操作过程中，由于人员、设备和场地等因素的影响，同一批次的试剂盒在不同的实验室进行操作可能存在差异，在错误操作的条件下甚至产生完全不同的实验结果，为更好的监控试剂盒使用过程中的随机差错导致的不合格实验，试剂盒一般会配置阴性对照和阳性对照，并且对阴性对照和阳性对照的实验结果数据进行规定，用以减少不同实验条件下的实验误差。阴/阳性对照的质量在试剂盒中的作用也非常关键。