[发明专利]一种检测小麦中呕吐毒素的方法

说明书

本发明涉及一种检测小麦中呕吐毒素的方法，属于粮食中真菌毒素快速检测以及食品安全技术领域。其以乙腈水溶液作为提取液，对毒素提取后，采用高效液相色谱条件进行呕吐毒素含量测定。根据常规实验室仪器配套情况，本发明针对小麦中受污染最严重的呕吐毒素，研制了无需使用专用净化柱的HPLC检测方法，降低了检测成本，简化操作过程，灵敏度和加标回收率高，重复性好。采用本发明检测方法测定不同小麦样品中的呕吐毒素含量准确可靠，其检出限为20μg/kg。

技术领域

本发明涉及一种检测小麦中呕吐毒素的方法，属于粮食中真菌毒素快速检测以及食品安全技术领域。

背景技术

呕吐毒素又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇，为镰刀菌属的禾谷镰刀菌属的次级代谢产物，在玉米、小麦、大麦等谷物中广泛存在。每年全世界粮食受呕吐毒素污染，损失巨大。近年来随着气候变化，呕吐毒素在粮食中的污染呈上升趋势。长期摄入呕吐毒素，人和动物体内蛋白质合成会受到抑制，从而造成机体损伤，因此高效快速检测呕吐毒素在粮食安全方面具有重大意义。

目前，检测小麦中呕吐毒素的方法主要有胶体金试纸条法、酶联免疫吸附法(ELISA)、超高效液相色谱法(UPLC)和高效液相色谱法(HPLC)等。胶体金试纸条法简便快速，可用肉眼进行定性分析，检测成本低。ELISA法对样品纯度要求不高，特异性强。以上两种方法均属于快速检测法，不能准确定量，易受到温度等条件的影响。UHPLC法定量准确，可是设备昂贵、对操作人员要求高且样品处理较为复杂，花费时间长。

HPLC法检测小麦中呕吐毒素是一种定量较为准确的方法，但常规HPLC法操作较繁琐、净化柱成本高，需进行优化以达到实验成本的降低以及工作效率的提高。

发明内容

本发明的目的是针对高效液相色谱检测方法存在的不足之处，提供一种检测小麦中呕吐毒素的方法，其无需采用专用净化柱，检测时间短，操作简单易行。

本发明的技术方案，一种检测小麦中呕吐毒素的方法，以乙腈水溶液作为提取液，对毒素提取后，采用高效液相色谱条件进行呕吐毒素含量测定。

进一步的，所述检测小麦中呕吐毒素的方法，步骤如下：

(1)提取液的制备：用体积浓度为80％-90％的乙腈水溶液，按照料液比(g/mL)1∶4-5的对小麦样品中的呕吐毒素进行提取，均质2-4min或摇床振荡25-35min，取上清液或滤液，再经离心或过滤后得到样品提取液；

(2)检测：取适量样品提取液，氮吹至干后，采用等量流动相复溶，过滤膜后供高效液相色谱检测。

进一步的，步骤(1)中摇床振荡提取条件为28-32℃，180-220r/min，振荡25-35min。

进一步的，步骤(2)中上清液或滤液氮吹至干流动相复溶的具体操作为：40-60kHz超声1-3min后，振荡器振荡25-35s，8000-12000r/min离心1-3min，取上清液过滤膜。

进一步的，步骤(2)所述滤膜为0.22μm滤膜。

进一步的，步骤(2)液相色谱条件为：

(1)色谱柱：poroshell，150mm×4.6mm，4μm；流动相：A相超纯水，B相纯甲醇；流速：0.5-0.7mL/min；柱温：30-35℃；进样量：10-20μL；检测器：VWD检测器；检测波长：218nm；

(2)流动相洗脱程序为：按质量百分比计，0-8min，83％-87％A液，其余为B液；9min，80％-100％B，其余为A液；13min，80％-100％B液，其余为A液；15min，83％-87％A液，其余为B液；20-25min，83％-87％A液，其余为B液；所述A液为超纯水；所述B液为纯甲醇。