[发明专利]一种人BRCA1/2基因变异检测质控品及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种人BRCA1/2基因变异检测质控品的制备方法，包括以下步骤：

1)将BRCA1/2基因变异阳性、稳定传代的若干种人肿瘤细胞系基因组DNA分别稀释至95～105ng/μL，获得若干种人肿瘤细胞系基因组DNA稀释液；

2)利用高通量测序的方法分别测定步骤1)所述人肿瘤细胞系基因组DNA稀释液中BRCA1/2基因上的变异位点，任选所述变异位点中的一个作为阳性对照位点，选中变异位点的野生型位点为阴性对照位点；

3)利用实时荧光定量PCR的方法对所述若干种人肿瘤细胞系基因组DNA稀释液中基因组的拷贝数进行定量；

4)根据步骤3)确定的若干种人肿瘤细胞系基因组DNA稀释液中基因组拷贝数和选中变异位点的目标等位基因频率计算获得所述若干种人肿瘤细胞系基因组DNA稀释液的混合比例；

5)按照步骤4)中所述的混合比例将所述若干种人肿瘤细胞系基因组DNA稀释液混合获得人BRCA1/2基因变异检测质控品；

所述变异位点的目标等位基因频率≥5％；

所述变异位点的目标等位基因频率＝变异位点所在人肿瘤细胞系基因组DNA稀释液中基因组的拷贝数/所述若干种人肿瘤细胞系基因组DNA稀释液的混合液中基因组的总拷贝数；

所述若干种人肿瘤细胞系基因组DNA稀释液的混合液中基因组的总拷贝数＝A*V_A+B*V_B+…..+N*V_N；

其中A为单位体积A细胞基因组稀释液的拷贝数，V_A为A细胞基因组稀释液的体积；B为单位体积B细胞基因组稀释液的拷贝数，V_B为B细胞基因组稀释液的体积；N为单位体积N细胞基因组稀释液的拷贝数，V_N为N细胞基因组稀释液的体积。

2.根据权利要求1所述的一种人BRCA1/2基因变异检测质控品的制备方法，其特征在于，所述BRCA1/2基因变异阳性、稳定传代的人肿瘤细胞系基因组DNA包括人肿瘤细胞系GM13705，GM13707，GM13708，GM13709，GM13710，GM13711，GM13712，GM13713，GM13714，GM13715，GM14090，GM14092，GM14093，GM14095，GM14096，GM14097，GM14170，GM14622，GM14623，GM14624，GM14626，GM14634，GM14636，GM14637，GM14638，GM14639，GM14684，GM14788，GM14805，GM16105和GM17509中的一种或几种基因组DNA。

3.根据权利要求2所述的一种人BRCA1/2基因变异检测质控品的制备方法，其特征在于，所述BRCA1/2基因变异阳性、稳定传代的人肿瘤细胞系基因组DNA包括人肿瘤细胞系GM13705，GM13707，GM13708和GM13709的基因组DNA。

4.根据权利要求1所述的一种人BRCA1/2基因变异检测质控品的制备方法，其特征在于，所述变异位点的目标等位基因频率为6～20％。

5.根据权利要求1所述的一种人BRCA1/2基因变异检测质控品的制备方法，其特征在于，所述步骤4)～步骤5)中还包括将无BRCA1/2基因变异的阴性人肿瘤细胞系基因组DNA与所述所述若干种人肿瘤细胞系基因组DNA稀释液混合，所述无BRCA1/2基因变异的阴性人肿瘤细胞系基因组DNA变异位点的基因频率为0。

6.根据权利要求1所述的一种人BRCA1/2基因变异检测质控品的制备方法，其特征在于，所述无BRCA1/2基因变异的阴性人肿瘤细胞系基因组DNA包括人肿瘤细胞系HCC1599，HCT-15，Jurkat和NCI-H720的基因组DNA；所述人肿瘤细胞系HCC1599，HCT-15，Jurkat和NCI-H720基因组DNA的浓度独立为50～100ng/μL；所述人肿瘤细胞系HCC1599，HCT-15，Jurkat和NCI-H720基因组DAN的体积比为(1～2):1:1:1。