[发明专利]Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法

权利要求书

1.一种Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法，其特征在于，所述Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法包括：

第一步，采用精氨酸诱导法制作胰源性糖尿病模型，350mg/kg精氨酸腹腔注射，一日一次，持续6周，期间小鼠普通饮食建立胰源性糖尿病组；同时采用配方饲料开放饮食建立高脂饮食组；阴性对照组：普通饮食饮水喂养6周；

第二步，采用普通病理进行胰腺组织病理评分；酶联免疫吸附试验检测血糖、血胰岛素、IL-1、TNF-α、chemerin；Real-Time PCR法检测胰腺组织PDX-1 mRNA和GLUT2 mRNA的表达PDX-1 mRNA；腹腔注射葡萄糖耐量试验小鼠空腹血糖、餐后两小时血糖、空腹胰岛素和餐后2小时胰岛素、HOMA-IR值测定采用腹腔注射葡萄糖耐量；

第三步，所有检测数据按平均数±标准差表示，正态分布用ShapiroWilk检验进行检验；组间比较使用单因素方差分析，若不符合正态分布按Mann-Whitney U检验比较；以P＜0.05为差异有统计学意义；应用SPSS 22.0for Windows软件实施全部检验过程。

2.如权利要求1所述的Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法，其特征在于，所述第一步的胰源性糖尿病模型的每组小鼠在造模前、造模后3周和6周共3个时间点进行取血检测，采用眼内眦方法取血；并行腹腔注射葡萄糖耐量试验，检测空腹血糖、餐后两小时血糖、空腹胰岛素、餐后2小时胰岛素等值，并计算胰岛素抵抗指数HOMA-IR值；到达造模后6周终点时，予以腹腔注射1％戊巴比妥钠50ml/kg进行麻醉，然后摘除眼球采集血液标本；

所有血液标本于4℃冰箱内静置1小时，后进行离心，离心完毕后收集上清，保存于-80℃待测；缺血完毕后打开胸腔并暴露心脏，剪开右心耳，将装有预冷PBS溶液输液器的针尖插入左心室内进行灌注至肝脏变白；灌注完毕后采集胰头部组织，用PBS溶液洗涤后置于4％多聚甲醛中固定，固定2-3天后进行石蜡包埋。

3.如权利要求1所述的Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法，其特征在于，所述第二步的普通病理的检测方法包括：将石蜡包埋的胰腺组织用石蜡切片机切成6μm厚的切片，于热水中烫平，固定于载玻片上，放入45℃恒温箱中烘干；普通病理采用苏木精和伊红染色；将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟，酸水及氨水中分色，各数秒钟，流水冲洗1小时后再入蒸馏水片刻，后于70％和90％酒精中脱水各10分钟，最后入酒精伊红染色液染色2～3分钟；染色后由病理科医师在光镜下观察结果并行胰腺组织病理评分。

4.如权利要求1所述的Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法，其特征在于，所述第二步的酶联免疫吸附试验的检测方法包括：根据试剂盒推荐的步骤进行，待检测的血样分为两份，每个样本检测时做一个复孔，浓度通过使用试剂盒所提供的标准品制成的标准曲线来比较确定。