[发明专利]一种戊型肝炎亚单位疫苗

说明书

本发明提供一种戊型肝炎亚单位疫苗，其中抗原蛋白时氨基酸序列为SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的戊型肝炎病毒ORF2蛋白。本发明的戊型肝炎ORF2蛋白制备的亚单位疫苗具有抗原稳定性高，纯度高，特异性强，不产生其他不相关抗体，检测方法方便准确的特点，为工业化生产戊型肝炎疫苗和诊断试剂奠定了坚实的基础。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种戊型肝炎亚单位疫苗。

背景技术

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus，HEV)引起的以肠道传播为 主的传染性疾病，具有急性病毒性肝炎的临床和流行病学特征,是一种经肠道传 播的严重危害人类健康的病毒性肝炎。目前戊型肝炎在我国以及许多发展中国 家中流行，在少数发达国家呈散发性流行。HEV是一种人畜共患病毒，已有报 道显示HEV在自然条件下能感染鸡、鹿和兔等多种动物。戊型肝炎在一些爆 发性发病鸡群中会使产蛋率下降20％以上。产蛋肉种鸡和30～72周龄产蛋母 鸡HS综合征死亡率比正常死亡率高，40～50周龄发病率最高。病鸡可能出现 鸡冠、肉垂苍白、沉郁、食欲不振、肛门口羽毛污染或有糊状粪便。

现有的戊型肝炎疫苗为传统疫苗，是使用完整的病原体作为制苗用抗原。 传统的灭活疫苗具有独特的优势如免疫后抗体均一，抗体效价高，但也存在制 造疫苗使用的毒株培养困难，与临床流行毒株的抗原性存在较大差异，从而影 响了攻毒保护效果的缺点，从而制约了灭活疫苗的应用。而且，使用全病毒抗 原制备的传统疫苗免疫后产生的抗体，在临床上无法区分野毒感染或是疫苗免 疫产生，会导致干扰疫情的监测。为解决传统疫苗的问题，就需要筛选新的毒 株或者开发新的亚单位疫苗以克服现有疫苗的问题。

发明内容

本发明目的是提供一种戊型肝炎亚单位疫苗，从而弥补现有技术的不足。

本发明提供一种亚单位疫苗，包含有抗原和疫苗佐剂，其中抗原是戊型肝 炎病毒ORF2蛋白；其中ORF2蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:2；

更优选的，所述的ORF2蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:4，编码基因的 核苷酸序列为SEQ ID NO:3；

本发明使用的戊型肝炎病毒ORF2蛋白，是使用重组大肠杆菌发酵制备的；

更进一步的，本发明的ORF2蛋白进行了灭活处理；具体是使用甲醛溶液 进行灭活；

本发明所提供的亚单位疫苗的制备方法，包括如下的步骤：

1)油相制备：

取兽用白油95份，硬脂酸铝1份，置于油相制备罐中加热至80℃后，再 加5份司本-80，至温度达到115℃时，维持30min，冷却后备用；

2)水相制备：

将大肠杆菌表达的ORF2蛋白使用生理盐水稀释成30μg/0.2ml，配成制苗 用抗原液；取灭菌后的5份吐温-80，加入配液罐中，同时加入抗原液95份， 搅拌20～30min，使吐温-80完全溶解；

3)乳化：

取油相2份放于高速剪切机内，开动电机慢速转动搅拌，同时徐徐加入 水相1份，以10000r/min，乳化5分钟完成制备。

本发明的戊型肝炎ORF2蛋白制备的亚单位疫苗具有抗原稳定性高，纯度 高，特异性强，不产生其他不相关抗体，检测方法方便准确的特点，为工业化 生产戊型肝炎疫苗和诊断试剂奠定了坚实的基础。

具体实施方式

本发明从全国各地临床发生戊型肝炎的养殖场分离HEV，并对其临床流行 病学和遗传变异进行分析，筛选到一株免疫原性好的戊型肝炎病毒(QD07株)， 从中获得了一种新型的戊型肝炎病毒抗原蛋白(ORF2蛋白)，将其在大肠杆菌 中获得进行可溶性的表达，制备亚单位疫苗。